[发明专利]检测玉米赤霉烯酮药物的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测玉米赤霉烯酮药物的酶联免疫试剂盒及其应用。

背景技术

玉米赤霉烯酮(结构式见图1)主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素，许多农作物如小麦、大豆等植物中存在玉米赤霉烯酮，玉米赤霉烯酮是一种酚的二羟基苯酸的内酯结构，分子式为C₁₈H₂₂O₅₀，它不溶于水、二硫化碳和四氧化碳，溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯和酸类，微溶于石油醚。玉米赤霉烯酮不但可以由霉菌产生，而且在许多高等植物体内也存在，并且是作为植物体内的一种激素来调控植物的生长，利用玉米赤霉烯酮可以提高玉米幼苗的抗旱和抗寒能力，但是玉米赤霉烯酮具有雌激素的作用，其强度为雌激素的十分之一，可造成家禽和家畜的雌激素水平提高。目前发现，猪对此毒素较为敏感，玉米赤霉烯酮作用的靶器官主要是雌性动物的生殖系统，同时对雄性动物也有一定的影响，在急性中毒的条件下，对神经系统、心脏、肾脏、肝和肺都会有一定的毒害作用，主要的机理是它会造成神经系统的亢奋，在脏器当中造成很多出血点，使动物突然死亡。一般玉米赤霉烯酮中毒的直接原因是饲料中有霉变的特别是由赤霉污染的玉米、小麦、大豆等。所以，在使用这些原料为主的饲料时就应当注意检测，目前，对动物玉米赤霉烯酮中毒尚无特效药治疗，生产中应立即停止饲喂可疑饲料，并对饲料加以检测，确定饲料中是否含有玉米赤霉烯酮。

目前玉米赤霉烯酮的测定方法主要有气相色谱、高效液相色谱法等，仪器测定方法灵敏度高，但样品前处理繁琐，仪器昂贵、需要专业的操作人员，在实际应用中受到一定的限制，通常作为确定性的定量检验方法，因此急需建立一种高灵敏度，并且能够现场抽样快速筛选检验方法。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种检测玉米赤霉烯酮的酶联免疫试剂盒，本发明酶联免疫试剂盒操作简单，耗时少，可用于饲料样本中玉米赤霉烯酮药物的快速检测，尤其适合现场大批量样品的筛选检测。

一种检测玉米赤霉烯酮的酶联免疫试剂盒，包括包被原和酶标记物，所述包被原选自玉米赤霉烯酮半抗原与载体蛋白的偶联物、玉米赤霉烯酮抗体和抗抗体；当所述包被原为玉米赤霉烯酮半抗原与载体蛋白的偶联物时，所述酶标记物为酶标抗抗体；当所述包被原为玉米赤霉烯酮抗体时，所述酶标记物为酶标半抗原与载体蛋白的偶联物；当所述包被原为抗抗体时，所述酶标记物为酶标玉米赤霉烯酮半抗原与载体蛋白的偶联物；所述玉米赤霉烯酮半抗原是将玉米赤霉烯酮和盐酸羟胺缩合反应，再与琥珀酸酐通过缩合反应得到的。

本发明的另外一个目的是提供一种玉米赤霉烯酮抗体和生产制备这种抗体的方法。所述的玉米赤霉烯酮抗体对游离或蛋白等结合玉米赤霉烯酮有结合特异性。所述的玉米赤霉烯酮抗体可为单克隆抗体或多克隆抗体。

玉米赤霉烯酮是小分子物质，只有免疫反应性，没有免疫原性，不能诱发机体产生免疫应答。为了制备玉米赤霉烯酮特异性抗体，必须首先将其结构改造得到玉米赤霉烯酮半抗原，玉米赤霉烯酮半抗原的合成方法是针对玉米赤霉烯酮分子进行结构改造。玉米赤霉烯酮半抗原是用玉米赤霉烯酮与盐酸羟胺缩合反应，引入一个新的羟基，再与琥珀酸酐反应得到具有羧基的玉米赤霉烯酮半抗原(图2)，该玉米赤霉烯酮半抗原与大分子载体蛋白偶联得到玉米赤霉烯酮完全抗原(免疫原或包被原)，其最终制备的抗体效果在后述发明中可以体现。

前述载体蛋白可为卵清蛋白、牛血清蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原常用载体蛋白。

本发明采用混合酸酐法或碳化二亚胺法将玉米赤霉烯酮半抗原与载体蛋白偶联，突出了玉米赤霉烯酮的特征结构，增加了玉米赤霉烯酮半抗原的免疫原性。经测定本发明中玉米赤霉烯酮半抗原与载体蛋白的结合摩尔比为17～20∶1，适合于抗体制备。

所述玉米赤霉烯酮特异性抗体可为玉米赤霉烯酮单克隆抗体或玉米赤霉烯酮多克隆抗体；它们均是前述玉米赤霉烯酮免疫原免疫动物制备得到的。

所述玉米赤霉烯酮单克隆抗体优选为玉米赤霉烯酮鼠单克隆抗体。

所述玉米赤霉烯酮单克隆抗体优选为杂交瘤细胞株D-2-3CGMCC No.5128分泌的单克隆抗体。