[发明专利]用于检测KRAS基因突变的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测KRAS基因第2外显子密码子12和/或密码子13突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：检测反应液；以及SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所表示的引物对。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述检测反应液包含PCR缓冲液、dNTP混合液、MgCl₂、DNA聚合酶和荧光染料。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括突变对照标准品和野生对照标准品，所述突变对照标准品包含KRAS基因第12密码子和/或第13密码子的突变型序列，所述野生对照标准品包含野生型KRAS基因序列。

4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括所述试剂盒的使用说明书。

5.一种用于检测KRAS基因第2外显子密码子12和/或密码子13突变的方法，所述方法包括以下步骤：

(a) 提取待测样品的基因组DNA；

(b) 对所提取的基因组DNA进行PCR扩增，其中，扩增使用SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所表示的引物对；以及

(c) 对扩增产物进行HRM分析，从而确定所述密码子12和/或密码子13是否发生突变。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(a)中所述待测样品为来自结肠癌、直肠癌或非小细胞肺癌的肿瘤组织或其石蜡病理切片。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，步骤(a)中所述基因组DNA的浓度被调节至2-8 ng/μL。

8.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，步骤(b)中所述PCR扩增的反应条件为：在94℃预变性3-5分钟，然后以94℃ 10-15秒、65℃ 30-45秒进行50次循环。

9.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，在进行步骤(c)中所述HRM分析前PCR产物经94℃ 30秒变性和40℃ 30秒复性后，在75℃到94℃收集荧光。

10.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中同时进行对突变对照标准品和野生对照标准品的PCR扩增，且在步骤(c)中同时进行对突变对照标准品和野生对照标准品的HRM分析。