[发明专利]一种由枯草芽孢杆菌制备的微生物肥料及其制备方法

说明书

技术领域

 本发明涉及一种由新的枯草芽孢杆菌制备的微生物肥料及其制备方法，属于微生物肥料领域。

背景技术

我国人口多、耕地少，且随着人口增长、工业和城市的发展耕地逐年递减。为此，我国增加农产品产量的唯一可行途径是提高单位面积产量。才能满足工业发展和人口增加对农产品的需求，化肥也就顺理成章的得到了广泛应用。长期以来不合理使用化学肥料带来的土壤板结、地力下降、生态破坏、环境污染以及农副产品品质下降问题，已经受到国家有关部门和农业科技界的高度重视。近几十年来，我国一直努力探索合理施肥、克服化肥的弊端及提高化肥利用率的有效途径。

农业肥料包括化学肥料和生物肥料，是我国农业生产不可替代的重要生产资料。其中，生物肥料作为农业生物工程学科的重要分支和土壤肥料学的重要组成部分，近十年无论在基础研究和应用研究方面都得到了迅速发展。近几年来我国微生物肥料发展很快，有多家企业从事生产经营，品种不断增加，同时也有一些国外产品打入国内市场。由于菌种等原因，目前市场的产品质量参差不齐，生产应用上出现了一些问题。据最近几年农业部监督抽查、跟踪抽查，国家统检的情况看，抽查合格率不到60%，产品质量问题主要是有效菌数不达标，保质期过短。微生物肥料中有效活菌数是产品质量的重要指标，有效活菌数不达标，产品质量就得不到保证，反映出来的是应用效果不稳定，其中原因主要是菌种问题，菌种在制备为微生物菌种剂后，在保藏过程中的存活能力下降，存活时间变短。这个问题实际上是由于这些微生物菌种剂所使用的菌种要么不能产生芽孢，要么产生芽孢的能力比较弱，或者产生的芽孢萌发能力差，不能很好渡过微生物菌种剂生产过程中的胁迫条件和库存、保藏过程，在生产使用过程中表现为菌种活性下降，生产性能减弱，繁殖速度变慢，抗逆性差。因此，菌种问题一直困扰我国微生物肥料的生产和发展。

发明内容

为了解决现有微生物肥料中菌种存活能力低、有效活菌数不达标、保质期过短，从而产品质量较差、应用效果不稳定等问题，本发明的目的是提供一种由枯草芽孢杆菌经发酵制备而成的微生物肥料及其制备方法。

本发明中提到的百分比和比例均是指重量百分比和重量比例。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种微生物肥料，其特征在于该肥料由一种新的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），保藏号为CGMCC No.5091的微生物菌种剂与常规化肥或有机载体混合而成；具体的，该菌种被命名为“新枯草芽孢杆菌1号”，该菌种分离自高产农田，并经驯化，长期以来性状稳定。

新枯草芽孢杆菌1号菌株在2010年7月22日提交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.5091，生物学命名Bacillus subtilis，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

该菌种的生物学特性为菌体杆状，为生芽孢需氧菌，其芽孢能抗高热（在100℃下30分钟仍能存活），并能在枯草浸出液中生长，其芽孢为椭圆或长桶形，0.6～0.9×1.0～1.5μm。于芽孢囊中央或近中央部形成，一般于腰间发芽。营养细胞杆状0.3～0.7×2～3μm，孤立或成短链，杆端半圆形。菌落为蔓延性，细皱或折迭，灰白，淡黄甚至黄色。在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。生长温度20-55℃，最佳生长温度37℃，最适PH7.1。在不良条件下，菌体转化产生芽孢，芽孢对不良环境抗逆性强，可耐受100℃高温 15分钟和干燥等恶劣条件。菌种以划线培养的方式在新1培养基（斜面培养基）上保藏，短期保藏条件为4℃，每2个月活化1次；长期保藏条件为-20℃，每6个月活化1次。

所述的枯草芽孢杆菌微生物菌种剂由如下方法制备而成：

1）将CGMCC No.5091菌株划线接入斜面培养基（新1培养基），30—38℃培养箱静置黑暗条件下培养36小时；

2）用无菌水冲洗斜面，形成菌悬液；

3）将1体积菌悬液接入20体积的新1液体培养基中，30—38℃有氧培养至菌体浓度为10⁸ 个/ml数量级；

4）将步骤3）得到的菌悬液加入到5-10倍体积的新2培养基中，30—38℃有氧培养至菌体浓度为10⁸个/ml数量级；

5）将步骤4）得到的菌悬液加入到50-100倍体积的新3培养基中，35-38℃有氧培养至菌体浓度为 10⁸个/ml数量级；