[发明专利]将人皮肤软骨分化为软骨细胞样细胞的方法

权利要求书

1.一种将人皮肤软骨分化为软骨细胞样细胞的方法，该方法包括以下步骤：将软骨暴露在机械应变下。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述机械应变包括间歇性流体静压、流体剪切应力、或其组合。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括将细胞暴露在低氧下。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括将软骨暴露在生长因子下。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述生长因子选自：BMP-2、BMP-4、BMP-6、BMP-7、转化生长因子β(TGF-β)和胰岛素生长因子I(IGF-I)。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括将细胞暴露在抗坏血酸下。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞存在于三维基质中以产生细胞基质构建物。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述三维基质进一步限定为合成聚合物、天然水凝胶或合成水凝胶。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述合成聚合物是聚(乙醇酸)、聚(乳酸)、聚乳酸-共-乙醇酸、聚-ε-己内酯或聚(甘油-癸二酸酯)(PGS)。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述合成聚合物是聚磷腈、聚酸酐或聚(原酸酯)。

11.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述天然水凝胶包含胶原、透明质酸、藻酸盐、琼脂糖、壳聚糖、纤维蛋白、凝胶、或其共聚物。

12.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述合成水凝胶包含聚(环氧乙烷)、聚(乙烯醇)、聚(丙烯酸)、聚(反丁烯二酸丙烯酯-共-乙二醇)、或其共聚物。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化步骤在体外、体内、或者先体外后体内进行。

14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化步骤在体外、在生物反应器内进行。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述生物反应器包括：

具有内侧和外侧的第一膜；

具有内侧和外侧的第二膜，所述第一膜被包封在所述第二膜内侧；

位于第一膜内侧的第一容积；

位于第一膜外侧、第二膜内侧的第二容积；以及

向第二容积添加流体、从第二容积去除流体、或实现这两种作用的结构，

其中，细胞/支架组合物位于第一膜内侧，所述第一膜具有以下一种或多种特征：

半渗透性；

生物相容性；

可生物降解性；和

可重吸收性；

所述第二膜具有以下一种或多种特征：

生物相容性；

流体不可透过性；

氧气可渗透性；

可重吸收性；

可生物降解性；和

可扩张性。

16.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述方法在体内进行。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述细胞存在于三维基质中以产生细胞基质构建物，所述方法在体内、在装置中进行，所述装置包含容纳所述细胞基质构建物的外部包壳。

18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述细胞存在于三维基质中以产生细胞基质构建物，所述方法在体内、在装置中进行，所述装置包含容纳所述细胞基质构建物的球囊膜。

19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，该方法还包括以下步骤：

a)将容纳细胞基质构建物的膜置于体内的空腔中；

b)将液体加入膜的内侧，直到膜膨胀达到空腔边界；

c)膨胀所述细胞基质；和

d)重吸收所述膜。

20.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述细胞存在于三维基质中以产生细胞基质构建物，所述方法在体内、在装置中进行，所述装置包含位于溶胀壁内侧的半透膜，其中，所述溶胀壁容纳细胞基质构建物。