[发明专利]一种用于蛋白、血清溶液的除菌和净化的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种杀菌净化方法，特别是一种用于蛋白、血清溶液的除菌和净化的方法。

背景技术

用物理或化学等方法杀灭或除去所有致病和非致病微生物的繁殖体和芽胞的手段称为灭菌。药剂学中灭菌可分为三种：物理灭菌法、化学灭菌法和无菌操作法。物理灭菌法主要有热灭菌法、射线灭菌法和过滤灭菌法；化学灭菌法有气体灭菌法和化学药剂灭菌法，主要适用于医用器具、设备和设施的消毒。灭菌方法的选择应兼顾药物的化学稳定性、制剂的物理化学稳定性。蛋白、血清溶液由于其为溶液，且具有遇热、射线不稳定的特性，一般采用物理灭菌法中的过滤灭菌法。过滤灭菌法是使药物溶液通过无菌的特定滤器，除去活的或死的微生物而得到不含微生物的滤液。研究发现，繁殖型细菌大小一般大于1μm，而芽孢大于0.5μm。

目前，市场上血清蛋白的灭菌过滤器滤膜孔径多采用0.2μm，但存在滤速与灭菌率相矛盾的现象。一般情况下，滤膜孔径越大，滤速越快，但同时由于滤膜孔径大，细菌的灭菌率会降低。如在0.1MPa气压下，将血清蛋白通过孔径为0.2μm的聚醚砜微孔过滤器发现，10min通过的血清蛋白体积为47L，滤速为282l/h。采用中国药典无菌检查法测得灭菌率为99.995%。同时在0.1MPa气压下，将血清蛋白通过孔径为1.2μm的聚醚砜微孔过滤器发现，10min通过的血清蛋白体积为85L，滤速为510l/h。采用中国药典无菌检查法测得灭菌率为96.875%，达不到高端领域的灭菌要求。

发明内容

发明目的：针对现有技术的不足，本发明公开了一种能够处理不同情况的蛋白、血清溶液的除菌和净化的方法。

技术方案：本发明公开了一种用于蛋白、血清溶液的除菌和净化的方法，包括以下步骤：

1）制定1个紧密排列的折叠式过滤器，其中上游滤膜孔径0.45-1.2μm，下游滤膜孔径为0.2μm；

2）取血清蛋白，在输入压为0.1MPa条件下，将血清蛋白通过上述折叠式过滤器；

3）通过公式测定10min时间内折叠式过滤器内通过的牛血清蛋白体积来计算滤速；

4）分析牛血清蛋白通过折叠式过滤器后的灭菌率；

5）采用121度蒸汽消毒方法对折叠式过滤器进行30分钟的消毒灭菌；

6）重复步骤2至步骤5过程，测定过滤器的有效使用次数，有效使用次数以最后一次仍能达到有效灭菌率(99.99%以上)为止。

步骤1所述的折叠式过滤器滤膜材质采用聚醚砜，对溶液没有影响，使用过程中存在问题少，因此微孔滤膜是目前应用最广泛的无菌过滤介质，且已成为制备无菌溶液的基本工具。微孔滤膜的材质主要有醋酸纤维素脂、硝酸纤维素脂、聚醚砜以及混合材料。

聚醚砜化学结构式：                                                ，分子结构中既不含热稳定性较差的脂肪烃链节，又不含刚性大的联苯链节，而主要由砜基、醚基和次苯基组成。砜基附予耐热性；醚基使聚合物链节在熔融状态时具有良好的流动性，易于成型加工；在对苯撑结构上交替连结砜基和醚基能得到非结晶性的聚合物。聚醚砜膜具有耐热等级高、机械性能好，尺寸稳定、耐化学药品性、耐热水、耐水解性、阻燃性的特点。鉴于聚醚砜的化学特性，本发明滤膜材质采用聚醚砜。

步骤2中所述血清蛋白为分子量为67000的牛血清蛋白。

步骤3所述公式为：滤速(l/h)=牛血清蛋白体积/10min。

步骤4所述灭菌率的分析采用中国药典无菌检查法测定。

无菌检测方法如下：

一、培养基的配制及接种

(1)硫乙醇酸盐流体培养基的配制：酪胨(胰酶水解)15.0g，酵母浸出粉5.0g，葡萄糖5.0g，氯化钠2.5g，L-胱氨酸0.5g，新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml，硫乙醇酸钠0.5g，琼脂0.75g(或硫乙醇酸，0.3ml)，水1000ml。除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。灭菌后置30℃～35℃培养。