[发明专利]乳酸双芽菌发酵液的制备方法及利用该发酵液制备乳酸双芽菌发酵液复合防腐剂的方法

权利要求书

1.乳酸双芽菌发酵液的制备方法，其特征在于乳酸双芽菌发酵液的制备方法，按以下步骤进行：一、分别对乳酸乳球菌、嗜热脂环酸芽孢杆菌、球芽孢杆菌和二芽孢接合酵母进行活化，得四种菌的活化菌液；二、从四种菌的活化菌液中提取四种菌的菌体；三、将步骤二得到的四种菌的菌体按菌体数量比1∶1∶1∶1进行混合，然后接种于装有发酵培养基的发酵罐中，接种量为8％～12％，在发酵温度为29～31℃、摇床速度为100～150r/min的条件下发酵45～50h，得发酵液；四、将发酵液置于摇床上于100～150r/min培养45～50h，即可完成乳酸双芽菌发酵液的制备。

2.根据权利要求1所述的乳酸双芽菌发酵液的制备方法，其特征在于步骤一中分别对乳酸乳球菌、嗜热脂环酸芽孢杆菌、球芽孢杆菌和二芽孢接合酵母进行活化的方法为：将浓度为0.05～0.15g/kg的乳酸乳球菌菌液按8％～12％的接种量接种于培养基A中，将浓度为0.1～0.2g/kg的嗜热脂环酸芽孢杆菌菌液按8％～12％的接种量接种于培养基B中，将浓度为0.05～0.15g/kg的球芽孢杆菌菌液按8％～12％的接种量接种于培养基C中，将浓度为0.2～0.4g/kg的二芽孢接合酵母菌液按8％～12％的接种量接种于培养基D中，然后于28～32℃恒温培养箱中培养45～50h，即完成活化；其中每200mL培养基A由2g葡萄糖、1g牛肉膏、1g乳糖、2g蛋白胨、1g酵母提取物和余量的蒸馏水组成；每5000mL培养基B由2000mL溶液a、2000mL溶液b和1000mL蒸馏水组成，所述2000mL溶液a由6g磷酸二氢钾、4g酵母膏和余量的蒸馏水组成，所述2000mL溶液b由0.2g硫酸锌、0.4g氯化钴、0.6g硼酸、0.06g钼酸钠和余量的蒸馏水组成；每1000mL培养基C由10g棉籽精粉、0.6g牛肉浸膏和余量的蒸馏水组成；培养基D为麦芽汁。

3.根据权利要求1或2所述的乳酸双芽菌发酵液的制备方法，其特征在于步骤二中从四种菌的活化菌液中提取四种菌的菌体的方法为：将四种菌的活化菌液分别离心，乳酸乳球菌活化菌液、嗜热脂环酸芽孢杆菌活化菌液和球芽孢杆菌活化菌液于2500～3500r/min离心25～35min，二芽孢接合酵母活化菌液于2500～3500r/min离心10～20min，然后分别收集四种菌体，再采用0.4mol/L、pH值为7.5的磷酸盐缓冲液洗涤四种菌体3～5次，离心收集菌体，即得到四种菌的菌体。

4.根据权利要求3所述的乳酸双芽菌发酵液的制备方法，其特征在于步骤三中接种量为10％。

5.根据权利要求4所述的乳酸双芽菌发酵液的制备方法，其特征在于步骤三中每2000mL发酵培养基由20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、4g NH₄NO₃、0.4g MgSO₄·7H₂O、0.01gMgSO₄、0.01gFeSO₄·7H₂O、0.2g CaCl₂·2H₂O、6g酵母膏、0.6g多胨和余量的蒸馏水组成。

6.根据权利要求5所述的乳酸双芽菌发酵液的制备方法，其特征在于步骤四中将发酵液置于摇床上于120r/min培养48h。

7.利用权利要求1制备的乳酸双芽菌发酵液制备乳酸双芽菌发酵液复合防腐剂的方法，其特征在于利用乳酸双芽菌发酵液制备乳酸双芽菌发酵液复合防腐剂的方法，按以下步骤进行：一、按体积份数将1～3份的乳酸链球菌素、1～5份的纳他霉素、1～5份的丙酸、2～8份的竹叶抗氧化物、2～5份的壳聚糖、2～4份的乙二胺四乙酸二钠、0.2～0.8份的体积百分比浓度为75％的乙醇、0.2～0.6份的生育酚和75～85份的活化水混合，得到混合液；二、按体积百分比将75～80份的混合液和20～25份的乳酸双芽菌发酵液混合，在45～55℃下反应1～3h，即可完成乳酸双芽菌发酵液复合防腐剂的制备。

8.根据权利要求7所述的利用乳酸双芽菌发酵液制备乳酸双芽菌发酵液复合防腐剂的方法，其特征在于步骤一中按体积份数将2.5份的乳酸链球菌素、2份的纳他霉素、3份的丙酸、5份的竹叶抗氧化物、3.5份的壳聚糖、3份的乙二胺四乙酸二钠、0.5份的体积百分比浓度为75％的乙醇、0.5份的生育酚和80份的活化水混合。