[发明专利]一种马桑内酯类物质的提纯方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种应用超临界萃取法提纯马桑内酯类物质的方法。

背景技术

马桑Coriaria sinica Maxim.为马桑科马桑属植物，是多年生落叶有毒的小乔木或灌木。其自然资源丰富，在我国分布广泛。马桑根部药用，用于治风湿麻木、风火牙痛、痰饮、跌打损伤、烫火伤、急性结膜炎等。马桑全株有毒，在民间有用于土农药的记载，马桑提取物对多种咀嚼式害虫具有明显的拒食和胃毒作用，可用作植物农药。

马桑内酯类化合物是马桑的主要活性成分，对中枢神经系统具有显著的药理作用。周莉君等研究表明马桑提取物对真菌抑制效果显著高于细菌，且醇提物抑菌效果优于水提物。张雁冰等通过对羟基马桑毒素和马桑亭的杀虫活性实验，表明羟基马桑毒素对小菜蛾具有明显的拒食作用。此外，马桑内酯类化合物还可用于点燃癫痫模型，具有安全性好、对脑无直接机械损伤等优点。

现有马桑内酯类化合物的提取方法有醇提，石油醚萃取除杂，大孔树脂吸附，柱色谱及重结晶等方法得到。该方法能耗大，步骤繁多，制备量少。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种马桑内酯类物质的提纯方法，该方法操作简单，制备量大。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种马桑内酯类物质的提纯方法，其特征在于包含以下步骤：

1）超临界萃取：将马桑药材粉碎，过20目筛，置于萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，通入甲醇作为夹带剂参与萃取，收集萃取物；

2）石油醚脱脂：向上述萃取物中加入3~5倍量石油醚回流提取2~4次，离心分离固液，得脱脂物；

3）柱层析：将上述脱脂物进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇洗脱，高效液相监测，收集相应流分，浓缩干燥得到马桑内酯类物质。

所述的马桑内酯类物质包括马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等物质。

所述步骤1）中的萃取参数为：萃取温度为28-40℃，萃取压力为20-30MPa，CO₂流量为15-25L/h，萃取时间为2-4h，分离釜Ⅰ温度为20-30℃，压力为6-12MPa，分离釜Ⅱ温度为8-15℃，压力为4-8MPa。

所述步骤3）中的硅胶粒度为100~300目，洗脱剂氯仿-甲醇洗脱比例2~15：5。

本发明的积极效果是：

（1）超临界萃取，萃取过程耗能低，萃取剂CO₂来源丰富、清洁无污染；

（2）本发明采用溶剂萃取法精制马桑内酯类物质，该法能快速的去处杂质，得到纯度高的马桑内酯类物质，工艺简单，成本低，效率高。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

下述实施例中硅胶柱层析采用高效液相监测接收洗脱液，具体方法如下（参照文献“马桑籽中马桑内酯类化合物的提取分离及其活性”）：

高效液相色谱条件：

色谱柱：ODS柱(250mm×4.6mm×5μm)；

流动相：15%乙腈；

流速：1ml/min；

检测波长：215nm；

柱温：室温。

实施例1：

取马桑干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，通入200ml甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为：萃取温度40℃，萃取压力20MPa，萃取时间2h，CO₂通入的量为15L/h，设定分离釜Ⅰ温度为20℃，压力为6MPa，分离釜Ⅱ温度为8℃，压力为4MPa，在分离釜Ⅱ中收集萃取物，加入500ml石油醚回流提取4次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物；

取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研匀，上硅胶（100目）柱层析，用氯仿-甲醇（2-15:5）洗脱，每接收100ml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂，得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质6.7g。

实施例2：