[发明专利]用慢病毒检测HIV耐药表型

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种慢病毒载体系统的构建、慢病毒颗粒的制备及检测HIV耐药表型的方法。 

背景技术

艾滋病是全球和我国的重要传染病之一，截止到2009年底，全球有3330多万艾滋病感染者，且以每天14000例新发感染者数量迅速增加。截至2009年10月，我国累计报告艾滋病病例319877例，其中包括102323艾滋病人，死亡49845例。而据2010年卫生部等单位对中国艾滋病疫情的估计，中国现存艾滋病病毒感染者和病人约74万，其中，艾滋病病人为10.5万人；估计2010年当年新发艾滋病病毒感染者4.8万人。随着艾滋病流行的快速增长及每年新发感染者人数的不断上升，国家不断加大防治力度，每年在治病人数也在逐年递增，同时由于治疗引起的耐药情况也随即出现并开始成为普遍关注的问题。由于国外大量研究发现尽早开始治疗可延长感染者向病人发展的时间从而延长患者生命，不少国家已经将提供艾滋病治疗的入选标准降低，我国也将免费治疗指标从原来的CD4＜200拷贝/mL改成了CD4＜350拷贝/mL的国际推荐标准，最近还在酝酿进一步调整为CD4＜500拷贝/mL。大量增加的治疗病人引发的耐药，以及治疗病人耐药毒株的进一步传播导致的原发耐药，成为艾滋病防治领域不得不面临和必须重视的问题，艾滋病病毒耐药性也逐渐成为威胁中国乃至全世界对抗艾滋病病毒的主要因素。 

目前，全世界流行的艾滋病病毒主要为HIV-1型，HIV-1分为M、O、N三组，其中HIV-1M组又是全球主要流行株。由于HIV-1的高度变异性，其在全世界、各地区及在不同个体间存在广泛的遗传学差异，根据病毒基因变异度，全世界流行的HIV-1M组至少可以为9个亚型(A、B、C、D、F、G、H、J、K)和14个重组流行株(Circulating recombinants forms，CRFs)，不同亚型间，HIV-1膜蛋白基因(env)的核苷酸差异约为20％-30％，聚合酶基因(pol)约为15％，pol基因的逆转录酶(RT)和蛋白酶(PI)编码区在不同亚型间的核苷酸差异约为10％-12％，氨基酸序列差异约为5％-6％。RT和PI蛋白中氨基酸残基的变化和差异将导致氨基酸替换和RT、PI蛋白的某些结构域局部立体构像的改变，由于RT和PI是目前几乎所有艾滋病抗病毒药物(逆转酶抑制剂和蛋白酶抑制剂)的靶基因，RT和PI基因核苷酸变化和其编码的氨基酸残基替换，以及由此可能导致的空间立体构像变化，是抗病毒治疗应答差异、临床治疗失败和耐药性产生的主要原因。 

西欧、美国、澳大利亚等工业化国家中，90％以上的艾滋病患者中的流行感染毒株为HIV-1B亚型，其他亚型和重组流行株相对少见，与此相反，目前在我国流行的HIV-1毒株绝大多数系非HIV-1B亚型，以HIV-1B’(泰国B)、CRF01_AE、CRF07/08_BC、HIV-1C等为主，HIV-1B(欧美B)流行株并不常见。深圳的流行株以CRF01_AE(约占50％)，CRF07_BC(35％)和B亚型(15％)为主，其它亚型偶有发现。 

迄今为止，美国FDA批准生产上市的18种针对RT和PI的抗艾滋病病毒药物，全部是根据在欧美国家流行的HIV-1B亚型毒株设计研制出来，并据此分析艾滋病患者的药物敏感度、耐受性产生、基因型变 化等；而非B亚型因其RT、PI基因的核苷酸和氨基酸序列与B亚型存在差别，亦将影响药物治疗敏感性和耐受性形成等，但相关数据尚不充分.我国由于出现耐药主要集中在90年代经输献血感染并接受早期抗病毒治疗的人群，而这一类人群主要感染亚型是B亚型，所以，国内的耐药研究也主要针对B亚型进行。近年来，随着其它亚型毒株流行的逐渐扩张，非B亚型毒株耐药相关研究开始成为大家关注的热点。因此，识别分析非HIV-1B亚型相关的药物耐受性突变，对于监测药物抗性株的进化和传播、确定艾滋病人抗病毒治疗策略和调整治疗方案，以及防止耐药性突变株的流行等具有十分重要的意义。