[发明专利]从全血样本中直接进行核酸扩增的试剂盒和方法

权利要求书

1. 一种以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒，其特征在于所述试剂盒的核酸反应体系内包括用于特异性扩增目的基因靶向序列的若干个引物对、PCR 缓冲液、dNTPs、MgCl₂、Taq DNA聚合酶；且体系内三羟甲基氨基甲烷的浓度在25-100 mmol/L之间，镁离子浓度在1.5-3.0 mmol/L之间，甘油浓度在10%-14%之间。

2. 根据权利要求1的以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒，其特征在于所述核酸反应体系内三羟甲基氨基甲烷的浓度在25-100 mmol/L之间，镁离子浓度在1.5-3.0 mmol/L之间，甘油浓度在10%-14%之间。

3. 根据权利要求1的以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒，其特征在于所述核酸反应体系内三羟甲基氨基甲烷的浓度在40-80 mmol/L之间，镁离子浓度在1.5-3.0 mmol/L之间，甘油浓度在10%-14%之间。

4. 根据权利要求1的以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒，其特征在于所述PCR缓冲液包括 Tris﹒Cl、氯化钾、硫酸铵、氯化镁； -20℃下pH值在8.0-9.0间。

5. 根据权利要求1的以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒，其特征在于所述核酸反应体系的终浓度组成为：PCR缓冲液 含25-100 mmol/L Tris, 50mmol/L KCl；dNTPs   0.01～0.2 mmol/L；引物序列 0.01～0.4 μmol/L；TaqDNA聚合酶     0.01～0.025 U/μL；MgCl₂ 1.5-3.0 mmol/L；甘油 10%-14%。

6. 一种从全血样本中直接进行核酸扩增的方法，其特征在于所述方法包括取全血样本作为起始材料，将全血样本加入权利要求1所述的以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒或将权利要求1所述的以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂体系加入全血样本中，直接进行核酸扩增反应，测定扩增产物的步骤。

7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述方法中全血样本选自人或动物的液体血液或干血。

8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述方法中液体血液为加入抗凝剂的血液或不加抗凝剂的血液；所述抗凝剂选自乙二胺四乙酸二钠盐、乙二胺四乙酸二钾盐、乙二胺四乙酸三钾盐、草酸钠、草酸钾、肝素和枸椽酸钠的一种或两种以上的组合。

9. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述方法中干血为加入抗凝剂的血液或不加抗凝剂的血液附着于固体表面干燥形成的血块。

10. 一种以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒在进行聚合酶链式反应、滚环扩增反应、链置换反应、连接酶链式反应或依赖核酸序列的扩增方面的应用。