[发明专利]从全血样本中直接进行核酸扩增的试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明属于核酸扩增技术领域，具体涉及一种从全血样本中直接进行核酸扩增的试剂盒和方法。

背景技术

基于聚合酶链反应(PCR)的核酸扩增技术是一种将极微量的核酸样本扩大数百万甚至数亿倍的现代分子生物学技术，以其简单、快速、特异等优点在生物科学各个领域被广泛使用。通常，PCR扩增需要基因组DNA作为模板，而基因组DNA是从外周血中提取而得。目前常用于提取外周血中DNA的方法有酚/氯仿提取法、盐析法、碘化钾法、煮沸裂解法等【Carpi FM，DiPietro F，Vincenzetti S，et al.Human DNA extraction methods：patents and applications.Recent Patents on DNA & Gene Sequences 2011，5(1)：1-7.】基于这些方法原理开发了很多商品化的DNA提取试剂盒。尽管如此，提取DNA的操作仍然繁琐而费时，DNA质量也参差不齐，而且容易造成样本间交叉污染。

如果不经过DNA提取，而直接从全血进行PCR扩增，则可以大大节约试验时间和成本，同时避免因繁多步骤造成的样本间交叉污染。Kogan SC等最早采用简单的加热法将血液样本煮沸后，取上清液用于PCR扩增，取得了不错的结果【Kogan SC，Doherty M，Gitschier J.An improved method for prenatal diagnosis of genetic diseases by analysis of amplified DNA sequences.Application to hemophilia A.The New England Journal of Medicine 1987，317(16)：985-990.】；之后，Mercier B等【Mercier B，Gaucher C，Feugeas O，et al.Direct PCR from whole blood，without DNA extraction.Nucleic Acids Research 1990，18：5908.】和Mccusker J等【Mccusker J，Dawson MT，Noone D，et al.Improved method for direct PCR amplification from whole blood.Nucleic Acids Research 1992，20(24)：6747.】在PCR扩增前分别采用95℃预加热或3个预变性循环的方法以消除血液中PCR抑制成分的影响，实现了从全血直接进行DNA扩增；Ohhara M等利用超声技术对血液样本进行预处理之后也实现了PCR扩增【Ohhara M，Kurosu Y，Esumi M.Direct PCR of whole blood and hair shafts by microwave treatment.Biotechniques 1994，17：726，728.】。虽然这些方法以全血为起始模板实现了PCR扩增，但仍需对血液样本进行预处理，增加了操作步骤，而且条件难以控制、重复性差、不能形成商品化试剂盒、不利于推广使用。此外，国内外学者还相继报道了多种从全血直接进行PCR扩增的方法【Yang YG，Kim JY，Song YH，et al.A novel buffer system，AnyDirect，can improve polymerase chain reaction from whole blood without DNA isolation.Clinica Chimica Acta 2007，380(1-2)：112-117.】。然而，这些方法中所加试剂并没有完全公开。因此，研究和开发全血直接PCR扩增法尤为必要。

发明内容

本发明目的在于提供一种以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒，解决了现有技术中以全血为起始模板直接进行核酸扩增时需要对全血进行预处理造成操作步骤繁琐等问题。

为了解决现有技术中的这些问题，本发明提供的技术方案是：

一种以全血为起始模板进行核酸扩增的反应试剂盒，其特征在于所述试剂盒的核酸反应体系内包括用于特异性扩增目的基因靶向序列的若干个引物对、PCR缓冲液、dNTPs、MgCl₂、Taq DNA聚合酶；且体系内三羟甲基氨基甲烷的浓度在25-100mmol/L之间，镁离子浓度在1.5-3.0mmol/L之间，甘油浓度在10％-14％之间。