[发明专利]一种纽莫康定B0的提取纯化方法

说明书

技术领域

本发明属药物化学领域，具体涉及一种纽莫康定B₀的提取纯化方法。

背景技术

纽莫康定B₀（Pneumocandin B₀）是由真菌产生的次级代谢产物，是合成抗真菌药物卡泊芬净（Caspofungin）的中间体。纽莫康定B₀由真菌发酵产生，发酵过程中会产生与纽莫康定B₀结构相近似的副产物及大量的色素，因此纽莫康定B₀的提取纯化方法较复杂。

在Pneumocandins From Zalerion Arboricola I. Discovery And Isolation（The Journal Of Antibiotics 45(12):1853-66）一文中描述了纽莫康定B₀的提取纯化方法：采用甲醇对发酵液提取，离心后的菌渣加入甲醇再提取2次，得到的甲醇提取液合并；甲醇提取液加水稀释后用SP207树脂吸附，先用65%甲醇洗，再用100%甲醇洗脱，收集纽莫康定B₀；加水稀释后用HP20树脂吸附，先用50%甲醇洗，再用100%甲醇洗脱，收集纽莫康定B₀；加水稀释后再次用SP207树脂吸附，先用65%甲醇洗，再用100%甲醇洗脱，收集纽莫康定B₀；浓缩，用醋酸异丙酯沉淀，离心过滤得到纽莫康定B₀固体，纯度为67%；最后用硅胶层析和HP20树脂吸附进行再次纯化，浓缩，用乙腈沉淀，最终纽莫康定B₀产品纯度约85%。

美国专利申请Purification Process（US6610822）提供的纽莫康定B₀的提取纯化方法，采用萃取和反萃取法，这一方法要使用大量的异丁醇、甲醇和庚烷等有机溶媒，反复萃取和洗涤，操作较复杂，最终沉淀得到的纽莫康定B₀固体，含量80%左右。

以上两种纽莫康定B₀的提取纯化方法都存在操作步骤复杂，发酵液色素和杂质难去除，最终产品色泽深和纯度不高等问题。

中国发明专利《制备纽莫康定B₀的方法》（专利申请号200910133118.0）描述了一种新的纽莫康定B₀纯化方法，主要步骤是：a）离心纽莫康定B₀发酵液，取菌丝体，用甲醇浸提纽莫康定B₀；b）将甲醇浸提液蒸干，再用正丁醇浸提纽莫康定B₀；c）将正丁醇浸提液蒸干，再用70-80%甲醇浸提纽莫康定B₀，过酸性氧化铝柱，收集流出液；d）将纽莫康定B₀收集液蒸干后，用60-70%甲醇溶解，上HP20吸附树脂，用85-95%甲醇洗脱，收集洗脱液纽莫康定B₀纯度在50-65%间；e）将纽莫康定B₀收集液蒸干，溶于60-70%甲醇中，上反相树脂YPR-Ⅱ，用85-95%甲醇洗脱，收集的纽莫康定B₀纯度大于90%；f）将纽莫康定B₀收集液蒸干后，用甲醇溶解，滴加少量水使之过饱和结晶析出，制得纽莫康定B₀，纯度可达到96%。这个纯化方法虽然能够改善纽莫康定B₀产品质量，脱除了大量色素和提高了产品纯度，但整个工艺步骤复杂，几乎每一步骤都要将纽莫康定B₀溶液蒸干，在实验室规模的小试中容易做到，但在工业化生产中是很难将纽莫康定B₀溶液蒸干，而且纽莫康定B₀在长时间加热下容易破坏，因此，该方法并不适合纽莫康定B₀的工业化生产。

因此寻找更有效的脱色方法和更简便的提取纯化方法，才有可能实现纽莫康定B₀的工业化生产。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的纽莫康定B₀的提取纯化难以产业化，提纯工艺复杂的缺陷，提供有效方法去除纽莫康定B₀中的色素，提高纽莫康定B₀的含量，并使其工业化生产变得更简便。

本发明提供了一种纽莫康定B₀的提取纯化方法，包括以下步骤：