[发明专利]恶性疟原虫pfs25蛋白突变体及其酵母表达方法有效
| 申请号： | 201110267829.4 | 申请日： | 2011-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN102286089A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 陈勇;蒋琳;雷清;杨军;高雪峰;应连芳;刘晓 | 申请（专利权）人： | 兰州生物制品研究所有限责任公司 |
| 主分类号： | C07K14/445 | 分类号： | C07K14/445;C12N15/30;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 上海翰鸿律师事务所 31246 | 代理人： | 李佳铭 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 恶性 疟原虫 pfs25 蛋白 突变体 及其 酵母 表达 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种恶性疟原虫Pfs25蛋白突变体，该突变体具有SEQ1所示的氨基酸序列。
2.一种适用于酵母表达的Pfs25蛋白突变体的编码基因，具有SEQ2所示的核苷酸序列。
3.一种在毕赤酵母中表达Pfs25蛋白突变体的方法，包括如下步骤：
(1)将Pfs25蛋白突变体编码基因置于三磷酸甘油醛脱氢酶(GAP)启动子的下游，构建重组酵母菌；
(2)以YPD培养基培养重组酵母菌；
(3)补加葡萄糖维持发酵液中的葡萄糖终浓度在0.5～1g/L范围；
(4)培养24～72小时，收获培养上清，提取目的蛋白；
其中所述的Pfs25蛋白突变体具有相当于Pfs25天然蛋白23-193位的氨基酸序列，并且第112、165、187的天冬酰胺被谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸替换。
4.根据权利要求3的表达方法，其特征在于，所述的Pfs25蛋白突变体相当于Pfs25天然蛋白第112、165、187的天冬酰胺被谷氨酸替换。
5.根据权利要求3的表达方法，其特征在于，重组酵母菌在29.0℃、pH6.0～4.0、溶氧＞20％条件下发酵培养。
6.根据权利要求5的表达方法，其特征在于，发酵过程中转速约350rpm，保持通气速度200L/h。
7.根据权利要求6的表达方法，其特征在于，发酵液中加入Antifoam 204作为消泡剂。
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