[发明专利]一种新的环维黄杨星D纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药原料药的纯化方法。

背景技术

环维黄杨星D是心血管疾病药物黄杨宁的有效成分。2010版中国药典虽然规定环维黄杨星D原料含量不得少于99％，但由于药典收载的环维黄杨星D的含量测定采用的是非水滴定。而该方法只能测定总生物碱含量。同时由于环维黄杨星D与其他黄杨生物碱结构相似，色谱行为相近，分离不易，纯化困难。因此目前市售的环维黄杨星D原料的实际含量仅为55～85％。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的环维黄杨星D纯化方法。

本发明的技术解决方案：以孔径在10-20nm的介孔硅胶为载体，采用接枝共聚方法制备介孔硅胶表面印迹固定相。将此固定相用于环维黄杨星D的分离纯化。

本发明公开了包括介孔硅胶的制备方法、介孔硅胶表面印迹固定相的制备方法以及基于介孔硅胶表面印迹固定相的新的环维黄杨星纯化方法。

介孔硅胶的制备方法：

——室温下，称取适量三嵌段聚合物P123和氯化铵，加入去离子水、乙醇和浓盐酸的混合溶液中，室温搅拌使之完全溶解得到澄清透明溶液；

——将适量1，3，5-三甲苯滴加到上述反应液中，在35℃搅拌10小时；

——在剧烈搅拌下，滴加四乙氧基硅烷到上述反应液中，35℃继续搅拌15分钟。

——将上述反应液转移至不锈钢聚四氟反应釜中，35℃静置水热反应24小时后再90℃反应24小时；

——趁热过滤，分别用乙醇、去离子水充分洗涤，90℃常压干燥10小时；

——550℃高温煅烧6小时除去模板剂。

介孔硅胶表面印迹的制备方法：

——介孔硅胶的活化。将介孔硅胶置于浓盐酸和去离子水混合溶液中，125℃回流12小时，用去离子水洗至中性，100℃真空干燥24小时。

——介孔硅胶的衍生化。称取适量上述活化后的介孔硅胶，加入乙醇，去离子水，搅拌，滴加γ-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，氮气保护下50℃反应24小时。冷却后过滤，分别用乙醇、去离子水洗涤，室温真空干燥24小时。

——介孔硅胶表面印迹固定相的合成。取一定量干燥后的环维黄杨星D对照品、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯溶解于氯仿中，氮气保护下搅拌30分钟，加入适量引发剂偶氮二异丁腈超声使溶解，通氮气5分钟备用。称取适量上述衍生化后的介孔硅胶，加入上述混合溶液，氮气保护下搅拌15分钟后50℃引发聚合8小时。反应结束后，过滤，将所得的介孔硅胶表面印迹固定相在索氏提取器中用甲醇∶乙酸＝4∶1的混合溶剂反复提取48小时以除去环维黄杨星D模板分子，最后用甲醇洗涤，50℃真空干燥24小时即得。

环维黄杨星D纯化方法：采用匀浆装柱法将上述介孔硅胶表面印迹固定相填充于不锈钢色谱柱(50mm×4.6mm，I.D.)。采用高效液相色谱仪，运用蒸发光散射检测器，采用梯度洗脱。甲醇中醋酸体积百分数在10分钟内由0％变为0.5％。环维黄杨星D原料药溶于甲醇后泵入色谱柱，梯度洗脱进行分离纯化，分段收集再浓缩、结晶、烘干即得高纯度的环维黄杨星D。

本发明的优点在于：纯化环维黄杨星D的过程简单，分离效能好，纯化得到的环维黄杨星D纯度可达90％以上，易于实现商品化。

附图说明

图1是本发明所用固定相的载体——介孔硅胶的扫描电镜图片

图2是本发明所用固定相的载体——介孔硅胶的N₂吸附-解吸附图

图3是本发明所用固定相的载体——介孔硅胶的孔径分布曲线

图4是本发明所用固定相的载体——介孔硅胶进行衍生化后的红外谱图

图5是本发明用于纯化环维黄杨星D的色谱图

图6是本发明用于纯化环维黄杨星D，环维黄杨星D纯度检查色谱图

具体实施方式

实施例1

介孔硅胶的制备