[发明专利]从动物加工副产物中提取RNA活性物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及核酸技术领域，尤其是从动物加工副产物中提取RNA活性物的方法。

背景技术

核糖核酸(Ribonucleic acid)，简称RNA，无论是在医药、保健品、食品加工业，还是在植物生长和预防病虫害方面都有非常广泛的应用前景，得到了欧美许多国家的高度重视。在肉食动物加工副产物，如：胰脏、脾脏、淋巴、胎盘、胸腺、小肠、肝脏、脑等中存在RNA，而随着肉食动物加工副产物数量日益增多，除了少数被食用外，大多数被丢弃，这不仅浪费了生物资源，还对生态环境造成了一定的污染。因此如何充分利用动物食品加工副产物制成高价值的RNA产品，同时减少环境污染是一项非常重要的研究工作，具有显著的社会和经济意义。

由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很多样。目前国内外主要从微生物、动物中提取RNA。提取制备工艺主要有去污剂法、盐酸胍法、稀碱法和浓盐法等，以及申请人早先申请的ZL200310109446.X，“注射用人胎盘核糖核酸的制备方法”发明专利。只是工业上目前通常采用稀碱法和浓盐法提取RNA，但用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，不具有生物活性。

发明内容

本发明针对不足，提出一种从动物加工副产物中提取RNA活性物的方法，制得的RNA具有较高的生物活性，以及含量更高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种从动物加工副产物中提取RNA活性物的方法，包括以下步骤：

①、配制下述试剂：

试剂A：0.1mol/l的醋酸盐缓冲液中包含0.4～0.6wt％的十二烷基硫酸钠、0.1％～0.3wt％的聚乙烯硫酸酯、0.1％～0.3wt％乙二胺四乙酸二钠，用醋酸调节其pH值至5.0；

试剂B：将0.1wt％的8-羟基喹啉苯酚与试剂A等体积混合，振摇200～400次，避光静置8～14小时，取上层液体；

试剂C：缓冲液饱和酚：将0.1wt％的8-羟基喹啉苯酚与试剂A等体积混合，振摇200～400次，避光静置8～14小时，取下层液体；

②、取新鲜的动物加工副产物，于0～8℃下破碎；

③、向步骤②破碎物中加入4～6倍重量的试剂B和4～6倍重量的试剂C，匀浆处理，离心取上清液加入0.05～0.30g/L蛋白酶，于30～50℃水浴30～50min；冷却至0～10℃；

④、取步骤③冷却液的上层，加乙醇醇沉，得产品。

优选的，步骤②破碎至原料尺寸为5～10μm。

优选的，步骤③中蛋白酶为木瓜蛋白酶或中性蛋白酶。

优选的，该方法包括纯化过程：向步骤④产品中加入0.3mol/L的醋酸盐缓冲液，搅拌，离心分离，取上清液；向上清液中加入2～3倍重的-10～-20℃的无水乙醇，保温1～2小时，离心分离，得沉淀物。

与现有技术相比，本发明采用复合溶剂和酶法集成技术，从来动物加工副产物中提取RNA活性物，得到的RNA的生物活性(增色效应)可达30％左右，RNA含量达到60mg/ml左右。

具体实施方式

一种从动物加工副产物中提取RNA活性物的方法，包括以下步骤：

①、配制下述试剂：

试剂A：0.1mol/l的醋酸盐缓冲液中包含0.4～0.6wt％的十二烷基硫酸钠、0.1％～0.3wt％的聚乙烯硫酸酯、0.1％～0.3wt％乙二胺四乙酸二钠，用醋酸调节其pH值至5.0；

试剂B：将0.1wt％的8-羟基喹啉苯酚与试剂A等体积混合，振摇200～400次，避光静置8～14小时，取上层液体；

试剂C：缓冲液饱和酚：将0.1wt％的8-羟基喹啉苯酚与试剂A等体积混合，振摇200～400次，避光静置8～14小时，取下层液体；

②、取新鲜的动物加工副产物，于0～8℃下破碎；

③、向步骤②破碎物中加入4～6倍重量的试剂B和4～6倍重量的试剂C，匀浆处理，离心取上清液加入0.05～0.30g/L蛋白酶，于30～50℃水浴30～50min；冷却至0～10℃；

④、取步骤③冷却液的上层，加乙醇醇沉，得产品。

下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。

实施例1

以牛胰脏制备RNA活性物为例，其工艺优化情况简要介绍如下：

1)提取