[发明专利]奶牛乳房炎链球菌亚单位疫苗GapC蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种奶牛乳房炎链球菌亚单位疫苗GapC蛋白，其特征在于，所述GapC蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.编码权利要求1所述GapC蛋白的基因。

3.含有权利要求2所述基因的载体。

4.制备权利要求1所述GapC蛋白的方法，其特征在于，该方法包括下述步骤：

(1)提取牛源链球菌DNA序列；

(2)根据NCBI数据库已公布序列AF375662设计引物，PCR扩增出GapC基因；

(3)将回收的该基因与pMD18-T载体连接后，转化到大肠杆菌XL-1-Blue中，经酶切鉴定，筛选阳性克隆，序列测定；

(4)酶切pMD18-T-GapC及pQE-30质粒，构建重组载体pQE-30-GapC，转化大肠杆菌XL-1-Blue，筛选出的阳性克隆培养后提取质粒，进行双酶切鉴定；

(5)在大肠杆菌XL-1-Blue中获得高表达的上述重组工程菌，随后经镍柱纯化后得到目的蛋白，即为GapC蛋白。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(5)中所述重组工程菌经过发酵培养进行优化，其发酵培养的条件为温度37℃、pH值7.0、装液量20％、种龄12-16h、转数180-220rpm、接种量为1％-3％。

6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，扩增GapC基因所用的引物如下所示，

5′-CGCATGGTAGTTAAAGTTGGTATT-3′

5′-GACAGCGATTTTTGCAAAATACTC-3′。

7.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述PCR反应条件为：95℃预变性15min，94℃ 45s，56℃ 45s，72℃ 2min，30个循环，72℃ 10min。

8.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，牛源链球菌为停乳链球菌(S.dysgalactiae)。

9.含有权利要求1所述GapC蛋白的亚单位疫苗。

10.权利要求1所述GapC蛋白在制备预防奶牛乳房炎亚单位疫苗中的应用。