[发明专利]一种薄壳山核桃组织培养繁殖方法

权利要求书

1.一种薄壳山核桃组织培养繁殖方法，包括以下步骤：

(1)选材及消毒处理：采用由薄壳山核桃种子繁育的优良实生幼苗为接种材料，取离根部10厘米以上的茎段为外植体，然后将选取的外植体剪切成3-4cm左右长的小段，经70％酒精消毒30秒，再用浓度为0.1％的升汞溶液消毒6～8分钟，最后用无菌水冲洗3～5次；

(2)试管芽苗培养：在超净的工作台上及无菌条件下，将步骤(1)中消毒后的外植体剪去接触消毒液的伤口，留1～2cm带芽茎段接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，其中光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为14小时，温度为25～28℃，湿度为50％～65％，培养25天，分化长成试管芽苗；

(3)增殖培养：将从步骤(2)中长成的试管芽苗，剪切带有1-2个腋芽的节段或顶芽后，在超净的工作台上及无菌条件下，转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为14小时，温度为25～28℃，湿度为50％～65％的条件下，对芽苗进行增殖培养，增殖系数为3.25～3.98，使其不断增殖，直至达到所需要的繁殖生产规模；

(4)壮苗培养：将步骤(3)中增殖后的试管芽苗，剪切带有1-2个腋芽的节段或顶芽后，在超净的工作台上及无菌条件下，接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃培养瓶中，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为14小时，温度为25～28℃，湿度为50％～65％的条件下，进行壮苗培养，25天后进入下一步骤；

(5)生根培养：将步骤(4)中经过壮苗培养后的试管壮苗，去掉基部组织和部分叶片，留3～4片叶片，在超净的工作台上及无菌条件下，接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养基的玻璃培养瓶中，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为14小时，温度为25～28℃，湿度为50％～65％的条件下，进行生根培养8～15天，生根率在90％～95％；

(6)移栽、成活：将步骤(5)中经生根培养的带有直根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭和黄心土的基质中，其中泥炭与黄心土的体积比为1∶1，然后浇透水，保持温度25～30℃，相对湿度85％以上，先闭光培养10天，后逐渐见光，在培养40～45天后，进行全光照，移栽成活率在70～80％；

所述的启动培养基为：每升基本培养基+3.0～4.0mg 6-苄基嘌呤+0.01～0.05mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的增殖培养基为：每升基本培养基+2.0～3.0mg 6-苄基嘌呤+0.05～0.1mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的壮苗培养基为：每升基本培养基+3.5～4.5mg 6-苄基嘌呤+0.08～0.2mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的生根处理产生根原基培养基为：每升基本培养基+0.2～0.5mgα-萘乙酸+0.3～0.6mg吲哚丁酸+2000～3000mg活性炭。

2.根据权利要求1所述的一种薄壳山核桃组织培养繁殖方法，其特征在于，所述的基本培养基包括常量元素、微量元素、铁盐和有机成分。

3.根据权利要求2所述的一种薄壳山核桃组织培养繁殖方法，其特征在于，所述的常量元素的组分和其对应的浓度如下：

硝酸钾           950～1900mg/L；

硝酸铵           825～1650mg/L；

磷酸二氢钾       85～170mg/L；

硫酸镁           185～370mg/L；

氯化钙           165～330mg/L。

4.根据权利要求2所述的一种薄壳山核桃组织培养繁殖方法，其特征在于，所述的微量元素的组分和其对应的浓度如下：

碘化钾            0.83mg/L；

硼酸              6.2mg/L；

硫酸锰            22.3mg/L；

硫酸锌            8.6mg/L；

钼酸钠            0.25mg/L；

硫酸铜            0.025mg/L；

氯化钴            0.025mg/L。