[发明专利]一种薄壳山核桃组织培养繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养繁殖方法，具体地说，是涉及一种薄壳山核桃的组织培养繁殖方法。

背景技术

薄壳山核桃[Carya illinoinensis(Wangehn.)K.Koch]原产于北美东部，为胡桃科山核桃属落叶乔木，对土壤酸碱度的适应范围比较大，在土层深厚、疏松、富含腐殖质的冲积平原或河谷地带生长迅速、长势良好。20世纪初引入我国，至今已有百年的历史，引种范围广泛，北至北京，南至海南岛，东至福建，西至成都；早年引种到江苏省的山核桃现在长势良好，已经进入稳产期。薄壳山核桃树体高大雄伟，树姿优美，是庭院美化和城市绿化的优良树种；其木材结构细密，且坚固强韧，是雕刻和制作高档家具和工艺品的上等用材，也是优良的军工用材；其果实为世界著名的高档干果、油料原料，壳薄易剥，味香甜，是理想的保健品和食品添加剂。

薄壳山核桃传统繁殖方法是采用种子播种繁殖，但薄壳山核桃种子价格昂贵，平均每公斤只有100多粒，导致种子繁殖成本高；扦插繁殖需要良种提供数量巨大的插条，繁殖材料受到很大的局限；嫁接繁殖需要大量砧木且技术要求高、人工成本高。上述几种传统的繁殖方式，都需要大量的繁殖材料且很难在短期内获得大量优质种苗。利用组织方法培养繁育薄壳山核桃苗，只需要少量的带芽茎段为外植体，且扩繁速度快，成本低，在短时间内能提供大量优质的山核桃幼苗。现有技术中，傅玉兰等仅在外植体消毒、获得无菌材料方面取得一些进展，没有进一步开展增殖、壮苗、生根等关键技术的研究。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种繁殖速度快、种苗质量好的薄壳山核桃组织培养繁殖方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种薄壳山核桃组织培养繁殖方法，包括以下步骤：

(1)选材及消毒处理：采用由薄壳山核桃种子繁育的优良实生幼苗为接种材料，取离根部10厘米以上的茎段为外植体，然后将选取的外植体剪切成3-4cm左右长的小段，经70％酒精消毒30秒，再用浓度为0.1％的升汞溶液消毒6～8分钟，最后用无菌水冲洗3～5次；

(2)试管芽苗培养：在超净的工作台上及无菌条件下，将步骤(1)中消毒后的外植体剪去接触消毒液的伤口，留1～2cm带芽茎段接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，其中光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为14小时，温度为25～28℃，湿度为50％～65％，培养25天，分化长成试管芽苗；

(3)增殖培养：将从步骤(2)中长成的试管芽苗，剪切带有1-2个腋芽的节段或顶芽后，在超净的工作台上及无菌条件下，转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为14小时，温度为25～28℃，湿度为50％～65％的条件下，对芽苗进行增殖培养，增殖系数为3.25～3.98，使其不断增殖，直至达到所需要的繁殖生产规模；

(4)壮苗培养：将步骤(3)中增殖后的试管芽苗，剪切带有1-2个腋芽的节段或顶芽后，在超净的工作台上及无菌条件下，接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃培养瓶中，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为14小时，温度为25～28℃，湿度为50％～65％的条件下，进行壮苗培养，25天后进入下一步骤；

(5)生根培养：将步骤(4)中经过壮苗培养后的试管壮苗，去掉基部组织和部分叶片，留3～4片叶片，在超净的工作台上及无菌条件下，接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养基的玻璃培养瓶中，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为14小时，温度为25～28℃，湿度为50％～65％的条件下，进行生根培养8～15天；生根率在90％～95％；

(6)移栽、成活：将步骤(5)中经生根培养的带有直根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭和黄心土的基质中，其中泥炭与黄心土的体积比为1∶1，然后浇透水，保持温度25～30℃，相对湿度85％以上，先闭光培养10天，后逐渐见光，在培养40～45天后，进行全光照；移栽成活率在80％～85％。

所述的启动培养基为：每升基本培养基+3.0～4.0mg 6-苄基嘌呤+0.01～0.05mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的增殖培养基为：每升基本培养基+2.0～3.0mg 6-苄基嘌呤+0.05～0.1mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；