[发明专利]家蚕中肠特异表达启动子P3及其应用有效
| 申请号： | 201110273394.4 | 申请日： | 2011-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN102296071A | 公开（公告）日： | 2011-12-28 |
| 发明（设计）人： | 夏庆友;蒋亮;程廷才;陆改;金盛凯;王根洪;徐汉福 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/10;C12N15/63;C12N15/66;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 家蚕 特异 表达 启动子 p3 及其 应用 | ||
1.家蚕中肠特异表达启动子P3，其特征在于：所述家蚕中肠特异表达启动子P3含有如SEQ ID No:2所示核苷酸序列，所述家蚕中肠特异表达启动子P3的碱基长度不超过2073，源于家蚕BGIBMGA008060基因。
2.根据权利要求1所述的家蚕中肠特异表达启动子P3，其特征在于：所述家蚕中肠特异表达启动子P3的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
3.根据权利要求1所述的家蚕中肠特异表达启动子P3，其特征在于：所述家蚕中肠特异表达启动子P3的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示的核苷酸序列。
4.权利要求1所述家蚕中肠特异表达启动子P3的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：以家蚕基因组DNA为模板，进行PCR扩增，得家蚕中肠特异表达启动子P3，所述左、右引物分别如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示，PCR扩增条件为：94℃预变性4分钟，94℃变性40秒、49℃退火40秒、72℃延伸2分钟，共30个循环，最后72℃延伸10分钟。
5.含有权利要求1所述家蚕中肠特异表达启动子P3的重组载体。
6.根据权利要求5所述家蚕中肠特异表达启动子P3的重组载体，其特征在于：所述重组载体为P3-EGFP-SV40片段同基础载体pBac[3×P3-DsRed af]片段连接而得重组载体pBac[P3-EGFP-SV40-3×P3-DsRed af]。
7.权利要求5所述重组载体的构建方法，其特征在于，所述P3-EGFP-SV40片段的构建，具体步骤如下：酶切所述如SEQ ID No:1或如SEQ ID No:2所示的核苷酸序列，与用相同内切酶酶切好的EGFP-SV40-1180载体连接，所述EGFP-SV40-1180载体由pSLfa1180fa与pBac[3×P3-EGFP afm]中EGFP绿色荧光蛋白构建，得中间载体P3-EGFP-SV40-1180，所得中间载体P3-EGFP-SV40-1180用限制性内切酶AscⅠ酶切，得P3-EGFP-SV40片段。
8.根据权利要求7所述重组载体的构建方法，其特征在于：所述EGFP-SV40-1180载体的构建，包括以下步骤：所述EGFP绿色荧光蛋白引物，上游引物如SEQ ID No：6所示序列，下游引物如SEQ ID No：7所示序列，以所述pBac[3×P3-EGFP afm]质粒为模板，进行PCR扩增；扩增产物用BamHⅠ和NotⅠ进行酶切，得所述EGFP酶切片段，同时用BamHⅠ和NotⅠ酶切所述已包含SV40片段的pSLfa1180fa载体，得所述pSLfa1180fa载体酶切片段，连接酶切所得所述EGFP酶切片段和所述pSLfa1180fa载体酶切片段，得EGFP-SV40-1180载体。
9.含有权利要求1所述家蚕中肠特异表达启动子P3在家蚕中肠特异表达活性蛋白的应用。
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