[发明专利]利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法

权利要求书

1.一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，包括：

(1)在100-200μL聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液中，加入2.9mL pH值为3.6的醋酸盐缓冲溶液，室温放置15min后测试其紫外吸收曲线；

(2)在n份与步骤(1)中相同体积的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液中，分别加入2.9mL含有不同浓度肝素的醋酸盐缓冲溶液，得到n份含有肝素的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液；其中每份含有肝素的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液中肝素的浓度为0.5-15μg/mL，20≤n≤80；

(3)将步骤(2)得到的n份含有肝素的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液，在室温下放置15min后，分别测试其紫外吸收曲线；

(4)根据步骤(1)和(3)中所得到的紫外吸收曲线，得出步骤(2)中所述的含有肝素的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液中肝素的浓度和紫外吸收曲线中670nm处吸收值与529nm处吸收值的比值的关系；

(5)将90-330μg的肝素样品溶解在29ml醋酸盐缓冲液中，加入1ml聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液，室温放置15min，测试其紫外吸收曲线；然后计算肝素样品的紫外吸收曲线中670nm处吸收值与529nm处吸收值的比值，利用步骤(4)中所述的肝素的浓度和紫外吸收曲线中670nm处吸收值与529nm处吸收值的比值的关系确定肝素样品中肝素的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，其特征在于：步骤(1)和(2)中所述的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液的制备方法为：称取聚乙烯亚胺3-6mg，溶解在10mL水中，然后边搅拌边滴加100-200μL浓度为48.6mg/mL氯金酸溶液，反应2-6天，得到聚乙烯亚胺稳定化金纳米颗粒的水溶液。

3.根据权利要求2所述的一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，其特征在于：所述的聚乙烯亚胺为超支化聚乙烯亚胺。

4.根据权利要求2所述的一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，其特征在于：所述的氯金酸与聚乙烯亚胺的质量比为1.62∶1。

5.根据权利要求2所述的一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，其特征在于：所述的反应2-6天中的反应温度为25-37℃。

6.根据权利要求1所述的一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，其特征在于：步骤(1)和(2)中所述的醋酸盐缓冲溶液的浓度为0.02-0.08M。

7.根据权利要求1所述的一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的含有不同浓度肝素的醋酸盐缓冲溶液的制备方法为：在pH值为3.6的醋酸盐缓冲溶液中加入不同质量的肝素，即得。

8.根据权利要求1所述的一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的n份含有肝素的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液中肝素的浓度分别为1μg/mL、1.5μg/mL、2μg/mL、2.5μg/mL、3μg/mL、3.5μg/mL、4μg/mL、4.5μg/mL、5μg/mL、5.5μg/mL、6μg/mL、6.5μg/mL、7μg/mL、7.5μg/mL、8μg/mL、8.5μg/mL、9μg/mL、9.5μg/mL、10μg/mL、10.5μg/mL、11μg/mL、11.5μg/mL、12μg/mL，n＝23。

9.根据权利要求1所述的一种利用聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子检测肝素含量的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的步骤(2)中所述的含有肝素的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液中肝素的浓度和紫外吸收曲线中670nm处吸收值与529nm处吸收值的比值的关系为：当步骤(2)中所述的含有肝素的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液中肝素的浓度为3-8μg/mL时，其浓度和紫外吸收曲线中670nm处吸收值与529nm处吸收值的比值呈指数关系，其中Y＝0.40614+1.02292×10^-4×e^(x/1.02369)，R²＝0.99058；当步骤(2)中所述的含有肝素的聚乙烯亚胺稳定化金纳米粒子的水溶液中肝素的浓度为7-11μg/mL时，其浓度和紫外吸收曲线中670nm处吸收值与529nm处吸收值的比值呈线性关系，其中Y＝-0.56446+0.15069X，R＝0.99757；肝素浓度的最低检测限为1.5μg/mL。