[发明专利]抗生素lobophorin A和lobophorin B的制备方法及其应用

说明书

技术领域：

本发明属于工业微生物领域，具体涉及抗生素lobophorin A和lobophorin B的制备方法及其在制备抗菌药物中的应用以及抗生素lobophorin B在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

Spirotetronate类抗生素是一类具有抗菌和抗肿瘤活性的天然产物，比如antlermicin，chlorothricin、kijanimicin、decatromicins、saccharocarcins、tetrocarcins和versipelostatins。lobophorinA，其结构如式(I)所示；lobophorin B，其结构如式(II)所示，两个化合物都被文献Bioorg Med Chem Lett，1999，9，2003-2006报道过。前人已经从与海藻共生的放线菌中分离得到，并显示出抗炎活性，但是未检测到抗菌和抗肿瘤活性(Jiang，Z.D.；Jensen，P.R.&Fenical，W.Lobophorins A and B，new antiinflammatory macrolides produced by a tropical marine bacterium.Bioorg.Med.Chem.Lett.，1999，9，2003-2006.)。

         式(I)                                 式(II)

发明内容：

本发明的第一个目的是提供抗生素lobophorin A和lobophorin B的制备方法。

本发明的抗生素lobophorin A和lobophorin B的制备方法，其特征在于，是从链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 1127的发酵培养物中制备分离得到的。

所述的抗生素lobophorin A和lobophorin B的制备方法，优选，其具体步骤如下：

a)制备链霉菌SCSIO 1127的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏B；

b)将浸膏A和浸膏B合并，经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇作为流动相，从体积比100∶0～0∶100梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比50∶1梯度洗脱下来的馏分Fr.1，氯仿-甲醇体积比25∶1梯度洗脱下来的馏分Fr.2。

c)馏分Fr.1经LH-20凝胶柱层析，以体积比为1∶1的氯仿-甲醇作为流动相洗脱，后经中压制备层析，以甲醇/水作为流动相，从体积分数15％-95％线性梯度洗脱，收集甲醇/水体积分数为90％梯度下的馏分，得到lobophorin B；

d)馏分Fr.2经LH-20凝胶柱层析，以体积比为1∶1的氯仿-甲醇作为流动相洗脱，后经中压制备层析，以甲醇/水作为流动相，从体积分数10％-60％线性梯度洗脱，收集甲醇/水体积分数60％梯度下的馏分，得到lobophorin A。

所述的a)步骤的制备链霉菌SCSIO 1127的发酵培养物优选通过以下方法制备：将活化的链霉菌SCSIO 1127接入种子培养基中，28℃，200rpm，培养48h制得种子液，将种子液以10％的接种量接入到发酵培养基中，28℃，200rpm，振荡培养144h，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有：豆粉3g，酵母提取粉3g，海藻糖10g，脯氨酸1g，牛肉浸膏3g，甘油6ml，K₂HPO₄ 0.3g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.1g，CaCO₃ 2g，粗海盐30g，余量为水，pH 7.4。经本方法制备的链霉菌SCSIO1127的发酵培养物中lobophorin A和lobophorin B的含量比较高。

本发明人通过实验发现，lobophorin A和lobophorin B对苏云金芽胞杆菌具有抗菌活性，MIC值分别为8μg/ml和2μg/ml，为开发抗菌新药提供了候选化合物。因此本发明的第二个目的是提供化合物lobophorin A和lobophorin B在制备抗菌药物中的应用。