[发明专利]微生物DHA发酵生产技术

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物DHA发酵生产技术，属于食品功能油脂生产技术领域。

背景技术

二十二碳六烯酸(简称DHA)是一种人类必需不脂肪酸之一，体内不能自我合成，必需通过食物摄入，具有促进婴儿脑细胞生长发育、保护视力，治疗心血管疾病及提高免疫能力等多种重要的生理功能，受到医疗界及食品界的广泛关注.目前DHA的商业来源主要是深海鱼油，但由于鱼油中DHA含量相对比较低，有重金属汞污染的风险，且受日趋匮乏的海洋资源的限制，利用微生物发酵法生产DHA有望成为高纯度DHA的有效来源。

专利“用寇氏隐甲藻工业化发酵生产二十二碳六烯酸的方法”(申请号：200910061833)利用寇氏隐甲藻(Crypthecodinium Cohnii)工业化发酵生产DHA油脂的方法；专利“使用改进量的氯和钾在微藻类中产生高水平的DHA”(申请号：200480035685)使用改进量的氯和钾在微藻类中产生高水平的DHA本发明公开了通过海洋微生物，包括异养的海洋沟鞭藻类隐甲藻，使用低水平的氯离子产生高度不饱和的脂肪酸的方法；专利“生产二十二碳六烯酸(DHA)的破囊壶菌菌株-SC1”(申请号：200580052523)发明涉及筛选一种未报道的破囊壶菌菌株-SC1，其产生明显数量的DHA，并且除了DHA以外还积累其各自的中间体脂肪酸。

裂殖壶菌是一种异养型酵母菌，其单细胞进行连续二均分裂，脂肪酸组成简单，DHA含量高，分离纯化简单，是获取天然高浓度DHA的很好资源。但目前普遍存在菌体密度较低，DH A含量相对不高等问题，较难进行工业化生产。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一个微生物DHA营养油发酵生产方法，提高微藻生物质产量，繁殖速度快、产油量及油脂中DHA含量。

本专利涉及了一种微生物DHA营养油的发酵生产方法，首先把裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)菌种接入摇瓶进行培养，然后接入种子罐放大培养，最后接入发酵罐进行2步发酵：第一步，温度控制在25-30℃，pH＝6，发酵培养基为葡萄糖、酵母膏、蛋白胨及无机盐组成，发酵2-3天；第二步，降温到20-25℃，继续发酵2-3天，发酵过程通过补加葡萄糖使之浓度始终控制在10-20％。

经发酵制得微藻生物量达到60g/L，其中，油脂占干生物质中的含量50-60％，其中DHA含量高达35-40％，DHA生产率达到8-10g/升.天。本发明DHA产量高、纯度高，生产工艺稳定、简单、成本低。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实例1

在1L发酵罐中，按10％浓度，加入培养基和种子液，在发酵罐进行2步发酵：第一步，温度控制在28℃，pH＝6，发酵培养基为葡萄糖、酵母膏、蛋白胨及无机盐组成，发酵2天；第二步，降温到20℃，继续发酵3天，发酵过程通过补加葡萄糖使之浓度始终控制在20％，经发酵制得二十二碳六烯酸油脂，经发酵制得DHA含量高达55％的油脂，DHA含量高达35％，DHA生产率达到8.8g/升.天。

实例2

在100L发酵罐中，按10％浓度，加入培养基和种子液，在发酵罐进行2步发酵：第一步，温度控制在30℃，pH＝6，发酵培养基为葡萄糖、酵母膏、蛋白胨及无机盐组成，发酵3天；第二步，降温到20℃，继续发酵3天，发酵过程通过补加葡萄糖使之浓度始终控制在20％，经发酵制得二十二碳六烯酸油脂，经发酵制得DHA含量高达60％的油脂，DHA含量高达40％，DHA生产率达到10g/升.天。

实例3

在1000L发酵罐中，按10％浓度，加入培养基和种子液，在发酵罐进行2步发酵：第一步，温度控制在30℃，pH＝6，发酵培养基为葡萄糖、酵母膏、蛋白胨及无机盐组成，发酵3天；第二步，降温到20℃，继续发酵3天，发酵过程通过补加葡萄糖使之浓度始终控制在20％，经发酵制得二十二碳六烯酸油脂，经发酵制得D H A含量高达60％的油脂，DHA含量高达38％，DHA生产率达到10g/升.天。