[发明专利]戴氏绿僵菌GYYA0601菌株用于产透明质酸的用途

权利要求书

1.戴氏绿僵菌Metarhizium taii GYYA0601菌株 CGMCC NO.2880 用于发酵生产透明质酸的用途。

2.透明质酸的发酵生产方法，其特征在于：以戴氏绿僵菌Metarhizium taii GYYA0601菌株 CGMCC NO.2880为菌种采用如下发酵方法制备透明质酸：

（1）菌种活化：将菌种接种于斜面菌种培养基上活化；

（2）摇瓶种子制备：挑取菌丝块到种子培养液中，26～30℃、转速150～200r/min培养3～5天；

（3）发酵：接种摇瓶种子到发酵培养基中，26～30℃、转速150～200r/min培养7～10天，终止发酵，去除菌丝体，获得含透明质酸的发酵液；

（4）分离：调整发酵液的pH值为8.0，加入胰蛋白酶在30～35℃酶解3～5小时，调整pH至6.8～7.2，加入乙醇搅拌后收集沉淀，将沉淀溶于去离子水，滤过，滤液加入乙醇搅拌，静置收集沉淀，用无水乙醇洗涤后再用丙酮洗涤，真空干燥，得透明质酸。

3.按照权利要求2所述透明质酸的发酵生产方法，其特征在于：步骤（4）所述分离为：调整1体积倍发酵液的pH值为8.0，按0.05g/100ml发酵液的比例加入胰蛋白酶，在30～35℃酶解3～5小时，调整pH至6.8～7.2，加入3～5体积倍的无水乙醇搅拌后收集沉淀，将沉淀溶于1体积倍的去离子水，滤过，滤液加入2～4体积倍无水乙醇搅拌，静置收集沉淀，用无水乙醇洗涤后再用丙酮洗涤，60℃真空干燥，得透明质酸。

4.按照权利要求2所述透明质酸的发酵生产方法，其特征在于：步骤（1）中所述斜面菌种培养基为：蔗糖25g/L、黄豆3g/L、酵母膏5g/L、蛋白胨2g/L、麦麸3g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO₄ 0.5g/L、琼脂18g/L、pH 6.0。

5.按照权利要求2所述透明质酸的发酵生产方法，其特征在于：步骤（2）中所述种子培养液为：蔗糖15g/L、蛋白胨4g/L、酵母膏2g/L、麦麸5g/L、KH₂PO₄ 1g/L，MgSO₄0.5g/L、pH 6.0。

6.按照权利要求2所述透明质酸的发酵生产方法，其特征在于：步骤（3）中所述发酵培养基为：甘露糖15～30g，牛肉蛋白胨3～9g，酵母膏0.5～2g, 磷酸二氢钾0.5～2.0g, 碳酸氢钠0.5～1.5g，初始pH 5～8, 蒸馏水 1L。