[发明专利]戴氏绿僵菌GYYA0601菌株用于产透明质酸的用途有效
申请号: | 201110280577.9 | 申请日: | 2011-09-21 |
公开(公告)号: | CN103014095A | 公开(公告)日: | 2013-04-03 |
发明(设计)人: | 肖建辉;肖代敏;刘洪美 | 申请(专利权)人: | 遵义医学院附属医院 |
主分类号: | C12P19/04 | 分类号: | C12P19/04;C12R1/645 |
代理公司: | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人: | 刘楠 |
地址: | 563000 *** | 国省代码: | 贵州;52 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 戴氏绿僵菌 gyya0601 菌株 用于 透明 用途 | ||
技术领域
本发明涉及微生物技术领域,特别是涉及一种戴氏绿僵菌GYYA0601菌株用于发酵生产透明质酸的用途以及发酵生产透明质酸的方法。
背景技术
透明质酸(hyaluronic acid,HA)又名玻璃酸,具有高度的保水、润肤及抗菌入侵的保护作用而广泛用作化妆品的添加剂。HA作为一种生化药物,主要用于治疗关节炎、眼科粘性手术、软组织修复以及外科手术后的粘性抑制剂等。HA是由D-葡糖醛酸和乙酰氨基-D-葡萄糖按1∶1的摩尔比组成的、平均分子量一般为50万~500万的酸性粘多糖。在细胞质膜内壁,在HA合成酶作用下,HA由尿苷二磷酸-N-乙酰氨基葡糖(UDP-GlcNAc)和尿苷二磷酸-葡糖醛酸(UDP-GlcA)两前提物合成。HA无种属差异性,无论何种来源,其结构和组成都是一样的,仅存在相对分子质量的差别。通常,以葡糖醛酸含量表示HA的纯度,化妆品级为中等分子量HA分子,含35%~45%的葡糖醛酸,医药级为高分子量HA分子,含42%~48%的葡糖醛酸。
上世纪30年代,美国Meyer等首先从牛眼玻璃体中分离出HA。70年代,Balazs等从鸡冠和人脐带提取HA,并配制成眼科手术用黏弹性辅助剂NIF-HA,开创了HA医学应用的先河。80年代,日本首先借鉴前人对某些链球菌产生HA这一重要发现,通过工业发酵生产HA。当前,HA的生产仍然主要是动物组织提取法和细菌发酵法。动物组织提取法的原料受限、产量低、分离纯化过程复杂(含硫酸软骨素、硫酸葡胺聚糖等多糖杂质),生产成本高,所获得的HA分子量也较小,不能满足市场需求。而细菌发酵法具有生产规模不受动物原料限制,发酵液中HA以游离状态存在,易于分离纯化,成本低,易于形成规模化工业生产,无动物来源的致病病毒污染的危险等优点。
细菌发酵生产使用的菌种主要归属于链球菌Streptococcus sp.,它有血清A型和C型,A型为人致病菌,C型为动物致病菌。目前生产菌种多为C型兽疫链球菌S.zooepidemicu。尽管细菌发酵具有动物组织提取无可比拟的优势,但链球菌发酵尚存不足:其一,链球菌多为病原菌或机会病原菌,发酵生产存在潜在危害;其二,链球菌的营养需求较高,大规模生产中用这些特殊成分作为培养基,成本太高。其三,HA发酵下游分离纯化时,需要杀灭和除去发酵液中的菌体,杀灭菌体常采用杀菌剂或高温处理,这将影响HA的分子构象和流变学特性。其四,因发酵液的黏度很高,直接过滤或离心除菌体非常困难,需要先进行稀释,再除去菌体,因此,发酵下游分离技术烦琐,增加成本。另外,链球菌是原核生物,兼性厌氧菌,不利于葡萄糖能量代谢转化更多的ATP,从而影响UTP合成及其相应合成HA的两前提物UDP-GlcNAc、UDP-GlcA的生成。因此,寻找新的生产菌种有较高的科学价值和现实意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服当前生产透明质酸方法的不足,提供一种真菌戴氏绿僵菌GYYA0601菌株用于发酵生产透明质酸的用途以及透明质酸的发酵生产方法。
为了解决上述技术问题,本发明采用如下的技术方案:
本发明提供了戴氏绿僵菌Metarhizium taii GYYA0601菌株CGMCC NO.2880用于发酵生产透明质酸的用途。戴氏绿僵菌Metarhizium taiiGYYA0601菌株是发明人在贵州省贵阳市羊艾茶场土壤中采集一种虫草,利用多途径多批次和次生子囊孢子微循环产孢方法(参见梁宗琦.中国真菌志(第23卷)虫草属.北京:科学出版社,2007.)分离培养获得二十余株菌株,所采的虫草和分离获得的菌株经鉴定为戴氏虫草Cordyceps taii和戴氏绿僵菌Metarhizium taii。GYYA0601菌株已于2009年1月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC,北京市朝阳区大屯路,中国科学院微生物研究所,邮编:100101),保藏编号为CGMCC No.2880,分类命名为戴氏绿僵菌,拉丁文学名为Metarhizium taii。
本发明还提供了透明质酸的发酵生产方法,以戴氏绿僵菌Metarhizium taiiGYYA0601菌株CGMCC NO.2880为菌种采用如下发酵方法制备透明质酸:
(1)菌种活化:将菌种接种于斜面菌种培养基上活化;
(2)摇瓶种子制备:挑取菌丝块到种子培养液中,26~30℃、转速150~200r/min培养3~5天;
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