[发明专利]微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因(Ms-Δ6-FAD)及用途

权利要求书

1.微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因，其特征是SEQ No：1。

2.微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因，其特征是SEQ No：10。

3.权利要求1或2所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因制备方法，其特征是将提取的微孔草RNA反转录为cDNA；利用GenBank中已公布的其它植物的Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析，根据保守区设计合成一对简并引物P1、P2；以得到的微孔草cDNA为模板扩增得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段核苷酸序列；根据测序得到的HPT基因核心片段序列分别设计微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因特异引物5’端外侧引物P3和巢式引物P4，分别与GeneRacer^TM试剂盒中自带的5’P和5’NP配对，以微孔草cDNA为模板，进行5’外侧和巢式PCR扩增反应，得到5’末端核苷酸序列；同样根据测序得到的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因核心片段序列分别设计微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因特异引物3’端外侧引物P5和巢式引物P6，分别与GeneRacer^TM试剂盒中自带的3’P和3’NP配对，以微孔草cDNA为模板，进行3’外侧和巢式PCR扩增，得到3’末端核苷酸序列；根据已克隆到的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因5’和3’末端核苷酸序列，设计与该基因编码区两端特异的引物P7、P8，扩增得到微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因的全长翻译区核苷酸序列。

4.权利要求3所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因制备方法中所用的相关引物，其特征是：

上游引物P1为：

P1：5’-TAYAGSAAGCTTGTGTTTGAG-3’

下游引物P2为：

P2：5’-ARTTCTTSGGGAGCGGCTTGG-3’

P3：5’-CGGAAAGACAATTTGCAAACAGAATACC-3’

P4：5’-TACCCAAACAGACTCAAAAAACAAAACC-3’

5’P为：5’-CGACTGGAGCACGAGGACACTGA-3’，

5’NP为：5’-GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA-3’；

P5：5’-TGGTACCCATTGCTTCTTTCTTATTTGC-3’

P6：5’-AATATAATTGTGCATCATTCTCTAAGGC-3’

3’P为：5’-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACG-3’， 

3’NP为：5’-CGCTACGTAACGGCATGACAGTG-3’

P7：5’-CTCCCATGGATGGCTGCTAAAATC-3’

P8：5’-GGCGGTCACCTCAGCTAATCTTAACCA-3’

其中：R＝A+G；Y＝C+T；S＝C+G。

5.权利要求1或2所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因在油料作物的转基因工作中的应用。

6.权利要求1或2所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因在牧草作物的转基因工作中的应用。

7.权利要求1或2所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因在除权利要求4或5所述的植物外的植物中的转基因工作中的应用。

8.权利要求1或2所述的微孔草Δ-6脂肪酸脱氢酶基因在除植物外的其它生物的转基因工作中的应用。