[发明专利]获得油菜早代稳定系的方法

权利要求书

1.获得油菜早代稳定系的方法，该方法包括以下步骤：

1）将两个遗传背景不同的油菜材料进行人工去雄杂交获得F₁代杂交种子； 

2）将F₁代杂交种子在培养基上用染色体加倍诱导剂进行人工染色体加倍，必须确保加倍成功，加倍是部分或全部染色体加倍；

3）对加倍后的F₁代单株进行染色体鉴定，通过染色体数目、形态鉴定加倍效果；

4）加倍后的F₁代植株进行自交或强制自交获得F₂代；

5）对F₂代进行田间种植观察，并鉴定每个单株的育性，选择可育后代自交获得F₃代；

6）对F₃代进行纯合度鉴定，通过形态、细胞学以及分子标记鉴定，对后代DNA进行聚合酶链反应扩增，电泳观察每个特异引物扩增下单株的DNA带型及条带数目，显示每个单株都是两个亲本的杂交后代，每个单株之间分子标记图谱一致，说明这些单株是纯合系---早代稳定系；

通过以上方式可以在F₂代获得稳定的纯合系----早代稳定系。

2.    如权利要求1所述的获得油菜早代稳定系的方法，其特征在于将F₁代杂交种子在培养基上用染色体加倍诱导剂进行人工染色体加倍的具体方法如下：

1）用纯度为75%酒精进行种子表面消毒25-40秒，用0.1%升汞消毒12-17分钟，然后用无菌水将种子表面的升汞冲洗干净，用无菌纸将种子表面的水分吸干，然后将种子接种在第一培养基上；

2)让种子在第一培养基上生根发芽，培养条件：温度23-25⁰C，白天光照12-16小时，光照强度2000-3000勒克斯，夜晚暗培养8-12小时，待植株长到1—2片真叶时，从下胚轴处剪下植株继续在第二培养基上生长；

3）将剪下的植株继续插入第二培养基上继续培养，待有侧芽分化后，将侧芽及植株转入第三培养基中进行生根培养；

4）生根培养二周后，植株长出粗壮的根后，将植株在室温炼苗3-7天，取出植株将植株上的培养基用自来水冲洗干净，并在浸泡缓冲液中浸泡15—30分钟后移栽到温室中，温室温度16⁰C—25⁰C，相对湿度60-80%，能保证移栽成活率在95%以上；

上述的第一培养基由以下配比的组分组成：

MS 培养基              1L

6-苄基腺嘌呤           0.5—1.5mg

染色体加倍诱导剂       30—70mg

蔗糖                   20—30g

琼脂                   8—10g，

第一培养基的pH=5.8—6.0，

上述的第二培养基由以下配比的组分组成：

MS培养基              1L

6-苄基腺嘌呤           0.5—1mg

染色体加倍诱导剂       20—40mg

蔗糖                   20—30g

琼脂                   8—10g，

第二培养基的pH=5.8—6.0，

上述的第三培养基由以下配比的组分组成：

MS 培养基               1L

α-萘乙酸               0.03—0.5mg

染色体加倍诱导剂        5—20mg

蔗糖                    20—30g

琼脂                    8—10g，

第三培养基的pH=5.8-6.0，

上述的浸泡缓冲液由以及下配比的组分组成：

水                       1L

易保或克露               0.6-1.2g

α— 奈乙酸              0.5—1mg。

3.如权利要求1或2所述的获得油菜早代稳定系的方法，其特征在于染色体加倍诱导剂采用秋水仙素、氟乐灵、氨磺乐灵中的至少一种。