[发明专利]获得油菜早代稳定系的方法

说明书

技术领域：

本发明与农业有关，特别与获得油菜早代稳定系的方法有关。

背景技术：

油菜新品种选育时间较长，正常情况下通过常规的人工杂交选育一个常规油菜品种需要6-7代的时间，选育杂交品种时间更长。常规油菜新品系选育是通过两个遗传背景不同的品系杂交形成F₁代， F₁代自交形成F₂代，F₂代再选择优良单株自交形成F₃代，F₃代再选单株自交，一直到F₆-F₇代才能获得稳定的油菜新品系，以1年1代计算，所花时间大概在7-8年的时间，通过异地加代也需要4年左右的时间。另外，可以在F₁代对油菜花粉进行小孢子离体培养，然后对培养后代进行人工染色体加倍获得稳定的单双倍体（doubled haploid ,DH系）----纯合系。该方法能有效缩短纯合系选育的时间，但该方法对易于小孢子离体培养的材料很有效，对于其他的不易于小孢子培养的材料而言只能通过常规自交的方式来获得稳定的纯合系，并且该方法投入的人力物力较大。对于远缘杂交或种间杂交，由于染色体数目不同，获得稳定的纯合系，难度较大，不管是通过常规杂交的形式还是小孢子离体培养的方式都难以获得稳定的纯合系。

目前，在油菜中还未出现过早代稳定系的报道。所谓早代稳定是指：两个不同遗传背景的植株杂交后在F₂或F₃代获得稳定纯合的株系，该株系遗传背景一致，能稳定遗传，即植株在杂交后代的前两代就遗传稳定，不再发生性状分离。目前，水稻中有过早代稳定系的报道，主要是通过二倍体植株与三倍体植株杂交，在杂交后代中自交选育而来的，其遗传及生物学机理还不明确。但该方法获得早代稳定系的效率较低，首先三倍体水稻不易获得，其次三倍体与二倍体不易获得杂交后代种子。

发明目的： 

本发明的目的是为了克服以上不足，提供一种能提高油菜新品系或新品种纯合的速度，提高育种效率，选育优良保持系、恢复系及常规油菜品种，获得油菜早代稳定系的方法。

本发明的目的是这样来实现的：

本发明获得油菜早代稳定系的方法，该方法包括以下步骤：

1）、将两个遗传背景不同的油菜材料（可以是常规油菜品系、油菜近缘属种、油菜种间材料）进行人工去雄杂交获得F₁代杂交种子，获得的杂交种子的数目要比较多；

2）、将F₁代杂交种子在培养基上用染色体加倍诱导剂进行人工染色体加倍，必须确保加倍成功，加倍可以是部分或全部染色体加倍（如甘蓝型油菜染色体38条，加倍后染色体为60-76条），但不能是嵌合体（嵌合体是指：部分细胞染色体加倍，其余细胞染色体未加倍）；

3）、对加倍后的F₁代单株进行染色体鉴定，通过染色体数目（根尖或幼嫩的花药，在显微镜下观察染色体数目，染色体数目较正常植株多，多一倍或多10条以上）、株叶形态鉴定加倍结果（叶片较正常植株更厚、花器官更大、植株整体较正常植株大等）；

4）、加倍后的F₁代植株进行自交或强制自交获得F₂代；

5）、对F₂代进行田间种植观察，并鉴定每个单株的育性（通过醋酸洋红对花粉染色，判断花粉育性）选择可育后代自交获得F₃代；

6）、对F₃代株系进行纯合度鉴定，通过形态（每个单株的生长发育的整齐度，叶色、叶型、植株高度、花器官大小、育性等）、细胞学（染色体的形态、染色体的数目）以及分子标记进行鉴定（用两个杂交亲本材料的特异SSR(simple sequence repeat,即简单重复序列,微卫星标记)引物或其他特异分子标记引物，对后代进行聚合酶链反应（或PCR反应，Polymerase chain reaction），电泳观察每个特异引物扩增下单株DNA的带型及条带数目），显示每个单株都是两个亲本的杂交后代，每个单株之间分子标记图谱一致，说明这些单株是纯合系---早代稳定系；

通过以上方式可以在F₂代获得稳定的纯合系----早代稳定系。

上述的方法中将F₁代杂交种子在培养基上用染色体加倍诱导剂进行人工染色体加倍的具体方法如下：