[发明专利]禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白的单克隆抗体及其制备方法无效
| 申请号： | 201110284909.0 | 申请日： | 2011-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN102304180A | 公开（公告）日： | 2012-01-04 |
| 发明（设计）人： | 成子强;王峰;张利;王桂花;王玥;于琳琳;姜艳萍;王晓伟;陈洪博 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C07K16/08 | 分类号： | C07K16/08;C12N5/20;C12N15/34;C12N15/63;C12R1/91 |
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| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 网状 内皮 组织 增生 病毒 膜蛋白 单克隆抗体 及其 制备 方法 | ||
1.一种禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白的单克隆抗体，其特征在于：是由保藏号为CGMCC NO 5019的杂交瘤产生的。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于：该方法是纯化后的原核表达产物His-env融合蛋白免疫Balb/C小鼠，经瘤细胞SP2/0与被免疫小鼠的脾细胞融合，筛选和克隆得到禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白的单克隆抗体，简称单抗1。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的筛选方法为：
将纯化后的原核表达产物His-env融合蛋白与该单抗1在体外结合，采用酶联免疫吸附方法筛选REV His-env的单克隆抗体。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的筛选方法为：
将纯化后的原核表达产物His-env融合蛋白与该单抗1在体外结合，采用转印免疫印迹方法确定与抗体发生结合反应的蛋白分子量，进一步筛选REV His-env的单克隆抗体。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的筛选方法为：
将REV SNV标准株病毒接种DF-1细胞，使该单抗1与病毒结合，采用间接免疫荧光筛选REV His-env的单克隆抗体。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的纯化后的原核表达产物His-env融合蛋白是通过如下方法获得的：将REV SNV标准株的env基因克隆入表达载体pET-28a质粒，得到了重组载体pET-28a-env重组质粒，使用0.4mmol/L IPTG诱导表达出了带有His标签的融合蛋白His-env，其分子量为45KD，之后采用SDS-PAGE法检测纯化。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的env基因其基因序列如SEQ ID NO.1所示。
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