[发明专利]一种酶活性提高的青蒿紫穗槐二烯合酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种突变型紫穗槐二烯合酶，其对应于SEQ ID NO：2氨基酸序列的第399位由苏氨酸突变为丝氨酸。

2.如权利要求1所述的蛋白，其特征在于，该蛋白是：

(a)具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的蛋白；或

(b)由(a)所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且保留(a)蛋白活性的由(a)衍生的蛋白；且该蛋白的氨基酸序列中对应于SEQ ID NO：3第399位上的氨基酸为丝氨酸。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸选自下组：

(i)编码权利要求1或2所述的突变型紫穗槐二烯合酶蛋白的多核苷酸；或

(ii)与(i)中的多核苷酸互补的多核苷酸。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码具有SEQID NO：3所示氨基酸序列的多肽。

5.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3或4所述的多核苷酸。

6.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求5所述的载体，或基因组中整合有权利要求3或4所述的多核苷酸。

7.一种生产突变型紫穗槐二烯合酶的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)培养权利要求6所述的宿主细胞，获得培养物；和

(2)从培养物中分离突变型紫穗槐二烯合酶。

8.权利要求1所述的突变型紫穗槐二烯合酶的用途，用于生产紫穗槐二烯和/或青蒿酸。

9.一种生产紫穗槐二烯的方法，其特征在于，所述的方法包括：利用权利要求1所述的突变型紫穗槐二烯合酶催化法尼基焦磷酸环化，从而获得紫穗槐二烯。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的突变型紫穗槐二烯合酶催化法尼基焦磷酸环化在胞内进行，包括步骤：将权利要求1所述的突变型紫穗槐二烯合酶的编码基因转化宿主细胞，培养该细胞，从而生产紫穗槐二烯。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，还在所述的宿主细胞中转化法尼基焦磷酸产生酶的编码基因。

12.一种生产青蒿酸的方法，其特征在于，所述的方法包括：将权利要求1所述的突变型紫穗槐二烯合酶的编码基因，法尼基焦磷酸产生酶的编码基因，青蒿酸合成酶编码基因，细胞色素P450还原酶编码基因转化入宿主细胞；培养该细胞，从而生产青蒿酸。

13.如权利要求7、9-12任一所述的方法，其特征在于，在25-45℃下培养所述的细胞。

14.如权利要求7、9-12任一所述的方法，其特征在于，在PH下6.0-10.5下培养所述的细胞。