[发明专利]一种用于富集金黄色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的制备方法及应用有效
申请号: | 201110288372.5 | 申请日: | 2011-09-26 |
公开(公告)号: | CN102426229A | 公开(公告)日: | 2012-04-25 |
发明(设计)人: | 孙力军;王雅玲;刘阳;徐德峰;聂芳红;刘唤明 | 申请(专利权)人: | 广东海洋大学 |
主分类号: | G01N33/531 | 分类号: | G01N33/531;G01N33/569;G01N1/40 |
代理公司: | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人: | 刘广生 |
地址: | 524000 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 富集 金黄色 葡萄球菌 igg 免疫 制备 方法 应用 | ||
1.一种用于富集金黄色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的制备方法,其特征在于:该方法以磁珠为载体,偶联人IgG,制备成能够富集金黄色葡萄球菌的免疫磁珠;
具体方法是:
(1)活化:取磁珠放入离心管中,加入活化缓冲液洗涤磁珠,反复三次,每次间隔3~5分钟,除去活化缓冲液后加入活化剂碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)各200μL,混匀,将磁珠于22~25℃条件下震荡孵育30~60分钟,将磁珠活化;
(2)偶联:用偶联缓冲液洗涤磁珠,反复三次,每次间隔3~5分钟,加入人IgG,混匀,于22~25℃条件下震荡孵育24小时,制成人IgG免疫磁珠;
(3)封阻:人IgG免疫磁珠经洗涤缓冲液洗涤,反复三次,每次间隔3~5分钟,加入封阻缓冲液于22~25℃条件下作用1~2小时,存放于保存缓冲液中,4℃保存待用;
上述各步骤中所述:
活化缓冲液:0.1M MES和0.05%吐温-20,pH6.0-6.5;
偶联缓冲液:0.1M MES和0.05%吐温-20,pH7.0-7.4;
洗涤缓冲液:0.1M MES,0.1%BSA,0.05%吐温-20;
封阻缓冲液:0.2M pH8.5 Tris溶液,0.1%BSA,0.05%吐温-20
保存缓冲液:0.1M MES,pH7.4;
活化剂:EDC和NHS,浓度均为1-5mg/mL,用活化缓冲液溶解,先加入EDC,混匀后加入NHS,震荡均匀。
2.一种用于富集金黄色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的应用,其特征在于:通过将免疫磁珠添加到待检样品中,在一定条件下达到分离或富集并检测金黄色葡萄球菌的目的,并以人IgG免疫磁珠分离效果为依据进行产品标注和宣传,具体应用为:
1)按照金黄色葡萄球菌检验国标方法中的样品前处理办法处理样品,免疫磁珠与样品在偶联缓冲液中于37℃充分震荡孵育1小时,对样品中金黄色葡萄球菌进行富集;
2)在37℃条件下,将富集的金黄色葡萄球菌在7.5%NaCl营养琼脂培养基中培养18~24小时后计数。
3.根据权利要求2所述的一种用于富集金黄色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的应用,其特征在于:利用制备的人IgG免疫磁珠对食品、饲料、化妆品、公共场所工具和临床样本中的金黄色葡萄球菌进行富集和检验。
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