[发明专利]放线菌素D新同系物2-甲基-放线菌素D及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物学、药物化学、有机化学领域，具体的说是设计一株链霉菌中提取分离得到的抗肿瘤细胞化合物2-甲基-放线菌素D以及该化合物的制备方法和应用，该化合物为放线菌素D的同系物。 

背景技术

平盖灵芝含有丰富的麦角甾醇、灵芝酸、灵芝多糖、氨基酸、多肽、腺苷、三萜类及多种微量元素，其中有机锗含量高达12380ppm，有机硒含量也很高。虽然，平盖灵芝化学成分目前已经研究得较为深入，但对平盖灵芝内生放线菌研究甚少。放线菌在自然界分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70％是各种放线菌所产生。放线菌起初从土壤中分离获得，随着研究的深入，人们开始从植物中分离放线菌，通过研究发现放线菌广泛分布在各种已研究过的植物体中，并且能产生一些重要的化合物，有些具有新的化学结构。而从真菌中分离放线菌的报道较少，从平盖灵芝内生放线菌中分离化合物更是鲜有报道。 

发明内容

为了从真菌中分离放线菌，本发明提供了一种放线菌素D新同系物2-甲基-放线菌素D及其制备方法。 

本发明的具体技术方案如下：该放线菌素D新同系物2-甲基-放线菌素D，其特征在于该化合物的化学结构式如下： 

本发明还提供了链霉菌累西菲链霉菌Streptomyces recifensis CGMCC No.5228发酵及萃取分离方法，其培养、提取分离步骤如下： 

1.菌株发酵 

种子培养基： 

酵母浸膏4.0^±1g，麦芽浸膏5.0^±1g，葡萄糖4.0^±1g，MgSO₄0.1^±0.05g，蒸馏水0.8～1.5L，pH-7.2； 

发酵培养基： 

溶性淀粉5.0^±1g，葡萄糖10.0^±2g，蛋白胨5.0^±1g，酵母浸膏5.0^±1g，NaCl4.0 ^±2g，K₂HPO₄0.5^±0.01g，MgSO₄0.5^±0.1g，CaCO₃2.0^±0.5g，蒸馏水08～1.5L，pH＝7.2； 

具体流程： 

发酵菌株为累西菲链霉菌Streptomyces recifensis CGMCC No.5228，该菌在培养基成分为的种子培养基中振荡培养60～80h。然后接种于发酵罐中，发酵罐发酵10.0L，转速1000rpm在28^±2℃下培养100^±5h。 

发酵菌株累西菲链霉菌Streptomyces recifensis保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，中国科学院微生物研究所菌种保藏中心)，保藏编号CGMCC NO.5228。 

2.有效成分的萃取、分离 

(1)萃取：将发酵离心，菌丝体与发酵液分离，发酵液用旋转蒸发仪浓缩10-20倍，醇沉，然后回收乙醇，清夜用氯仿或乙酸乙酯萃取2-3次，合并萃取液后浓缩。 

(2)分离：将上述得到的浸膏应用硅胶柱层析，以氯仿∶甲醇 梯度洗脱， 薄层色谱检测，收集含有2-甲基-放线菌素D的流份，合并浓缩后再经凝胶LH-20层析，以氯仿∶甲醇＝5∶4洗脱，薄层色谱检测，得到2-甲基-放线菌素D纯品。 

上述步骤(2)中乙醇用95％浓度，硅胶柱层析中，先以氯仿∶甲醇＝100～30∶0∶70梯度洗脱，然后以氯仿∶甲醇＝10～0∶90～100梯度洗脱。 

上述提取分离得到放线菌素D新同系物2-甲基-放线菌素D在制备治疗抗肿瘤药物用的医用。 

3.化合物的结构表征