[发明专利]一种齐墩果酸三糖皂苷类成分的制备工艺

说明书

技术领域

本发明属于医药、兽药技术领域，涉及西南银莲花中的一种齐墩果酸皂苷类成分3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷的制备方法。该类成分可以通过溶剂提取法、碱水解法、大孔树脂吸附法、小孔树脂吸附法、ODS反向硅胶、动态轴向柱色谱法等任意一种方法，或这些方法的任意组合制备获得。所制得的齐墩果酸三糖皂苷类成分含量高达95％以上。

背景技术

西南银莲花(Anemone davidii Franch)，又名铜钱草(湖北)、铜骨七(四川)和钻骨风(贵州)，来源于毛茛科银莲花属西南银莲花的干燥根状茎，生长于海拔950～3500m的山地中，分布于西南及湖北西部和湖南西北部。具有活血止痛、祛瘀消肿和补肾之功效，可用于治疗跌打损伤、风湿痛、劳伤、阳痿和腰痛。现代药理研究表明西南银莲花具有祛风湿、消痈肿、抗癌、抗肿瘤、抗菌等多种功效。该植物富含五环三萜皂苷，尤以齐墩果酸糖苷和常春藤配基糖苷为主，在体外可以明显抑制肺癌、结肠癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、前列腺癌、黑素瘤以及白血病等癌细胞的生长。

发明内容

本发明利用现代分离技术及鉴定手段对西南银莲花进行系统的化学成分分离，从中分离得到一种齐墩果酸皂苷类成分：3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷，通过与西南银莲花的水提物和醇提物成分比较分析发现，碱水解后产物中3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷的含量较水解前大大提高。西南银莲花药材资源丰富，3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷的制备工艺简单易行，适合工业化大量生产，具有广阔的市场前景和开发价值。

本发明的具体技术方案如下：

1、3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷的制备方法，包括以下步骤：

第一步，将西南银莲花药材粉碎成粗粉，用水或0.1-95％乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得西南银莲花提取物。

第二步，西南银莲花提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH3-7，离心，去沉淀，即得西南银莲花提取物水解液。

第三步，西南银莲花提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40％乙醇、50-80％乙醇、95％乙醇洗脱，收集50-80％乙醇洗脱部分，蒸干，用水溶解后经过小孔树脂吸附，收集甲醇-水6∶4洗脱部分，即得XNY58组分。

第四步、XNY58组分经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水(6∶4-9∶1)的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为

第一组甲醇6份∶水4份；

第二组甲醇7份∶水3份；

第三组甲醇8份∶水2份；

第四组甲醇85份∶水15份；

第五组甲醇9份∶水1份；

第五步、收集甲醇85份∶水15份的洗脱部分，经Sephadex LH-20柱甲醇-水7∶3洗脱，经ODS动态轴向色谱柱制备，甲醇-水8∶2洗脱得到化合物I，经对照品比较及LC/MS/MS测试，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷，用高效液相色谱法测定化合物I含量。

液相条件为：乙腈∶0.1％磷酸水＝45∶55，检测波长为203nm，柱温25℃，色谱柱：COSMOSIL4.6*250mm。

本发明所述的齐墩果酸皂苷类成分是单一成分的化合物，其化学名称为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷。

附图说明：

图1是3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷的分子结构式；

图2是3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷的HPLC分析图；