[发明专利]一种犬重组干扰素α及制备方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种犬重组干扰素α，同时还提供了犬重组干扰素α的制备方法，为基因工程方法生产重组犬干扰素，属于生物制品领域。

背景技术

随着国内工作犬(军犬、警犬、实验用犬等)、肉用犬以及宠物犬等犬类饲养量的大幅度增加，病毒性疾病益成为威胁犬类生命的直接原因。人与犬的亲密接触大大增加了人被病毒感染的机会。如狂犬病毒、犬细小病毒和犬瘟热病毒等，都会给人类健康带来极大的威胁，已引起全社会的关注。在兽医临床方面，由于疫苗的使用、保存、运输等方面的原因，常会使免疫失败，而疫苗研究的时间较长，不能及时地用于新病毒的临床治疗。因此，若要综合控制犬病毒性疾病，需要安全、有效、副作用少的药物。犬干扰素具有广谱抗病毒活性，在一定程度上可以满足上述要求，具有有很高的临床应用价值。

1957年，英国科学家Alick Isaacs和lean Lindenmann利用鸡胚绒毛尿囊研究流感干扰现象时，发现一种能够干扰病毒繁殖的物质，称之为干扰素(interferon，IFN)．从此以后，IFN一直是病毒学、细胞学、分子生物学、临床医学、免疫学、肿瘤学等相关领域的研究热点．目前，重组人干扰素已广泛应用于治疗乙肝、心肌炎等病毒性感染且获得了较好的疗效。

Himmler等于1987年首先开始研究犬干扰素（CaIFN-α）基因,利用人干扰素α的cDNA为探针，从犬的全基因组文库中克隆出CaIFN-α基因，报道了该序列并申请了专利，其对犬细胞的生物活性为3×10⁵IU/L。

我国科研工作者也相继展开了关于犬干扰素α重组、表达等方面的研究，并获得了一系列成果。夏春等利用PCR技术扩增、克隆了拉布拉多犬和德国牧羊犬的干扰素基因alphaIFN并进行了测序【夏春，汪明，夏兆飞.拉布拉多犬和德国牧羊犬干扰素alpha基因克隆及测序.农业生物技术学报1999,7（3）】但未进行表达，应用方面的研究。项黎丽等克隆了犬干扰素α基因序列，利用IPTG化学试剂进行了诱导表达，经纯化获得了纯度较好的犬α干扰素【项黎丽，闫若潜，盛敏等，犬α干扰素的克隆、表达及纯化.中国动物检疫2010,27（1）35-38】，但未对发酵培养进一步研究；本发明进行了不同程度的发酵培养研究且获得了高纯度的犬重组干扰素。

发明内容

本发明提供了一种犬重组干扰素α。

本发明还提供了犬重组干扰素α的制备方法。

本发明公开的犬重组干扰素α，其特征在于：将犬干扰素α基因与表达载体pBV220进行连接。

所述犬重组干扰素α的基因，为以下序列：

ATG TGC CAT CTG CCG GAC ACC CAT GGC CTG CGT AAT TGG CGT GTG CTG ACG CTG CTG GGC   60

CAG ATG CGT CGT CTG AGC GCG GGT AGC TGC GAC CAT TAT ACC AAC GAT TTT GCG TTC CCG   120

AAA GAG CTG TTT GAT GGT CAA CGT CTG CAA GAA GCC CAG GCG CTG AGC GTG GTG CAT GTG   180

ATG ACC CAG AAA GTG TTT CAC CTG TTT TGC CCG GAT ACG AGC AGC GCG CCA TGG AAT ATG   240

ACC CTG CTG GAA GAA CTG TGC AGC GGC CTG AGC GAA CAG CTG GAT GAT CTG GAA GCG TGC   300

CCA CTG CAG GAA GCC GGT CTG GCG GAA ACC CCG CTG ATG CAT GAA GAT AGC ACC CTG CGC   360

ACC TAC TTT CAG CGC ATT AGC CTG TAT CTG CAG GAC CGT AAC CAT AGC CCG TGC GCG TGG   420

GAA ATG GTG CGT GCG GAA ATT GGC CGT AGC TTT TTC AGC AGC ACG ATC CTG CAA GAG CGT   480

ATT CGT CGT GGC AAA TAA                                                           498