[发明专利]一种酪蛋白活性单肽及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种酪蛋白活性单肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）在50℃～55℃，pH 6.0-7.5的条件下加入木瓜蛋白酶对酪蛋白进行酶解，得酶解液；

（2）当水解度达到9％～10％时，90～95℃加热15～20min灭酶，终止酶解反应以控制生物活性肽的分子量；

（3）将灭酶活的酶解液依次通过膜分离、大孔树脂、凝胶色谱、反相高效液相进行分离纯化，即得所述生物活性肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（3）中将灭酶活的酶解液在4℃下以6000 g离心20分钟，将上清液经超滤，取分子量小于3000道尔顿的组分，采用大孔树脂NKA-II, 收集10-20%（w/w）乙醇洗脱液，接着采用Sephadex G-25,流动相为去离子水，检测波长220nm，按吸收峰顺序收集；经Sephadex G-25分离得到的活性的组分再经C₁₈高效液相色谱分离纯化，分离条件为：5-40%乙腈和95-60%去离子水梯度洗脱，检测波长220nm，按吸收峰顺序收集。

3.由权利要求1所述制备方法制得的具有提高发酵液中多糖含量的酪蛋白活性单肽。

4.根据权利要求3所述的酪蛋白活性单肽，其特征在于通过液相色谱-电喷雾串联质谱测定其分子量为801.4道尔顿，该活性单肽氨基酸序列为：Asn-Pro-Ser-Lys-Glu-Asn-Leu。

5.权利要求1所述的酪蛋白活性单肽的应用，其特征在于将酪蛋白活性单肽与甘油混合应用于发酵乳发酵中，提高发酵液中多糖含量。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于以发酵乳总重计，酪蛋白活性单肽的添加量为0.001%-0.1%。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于发酵乳总重计，甘油添加量为0.1%-2%。