[发明专利]毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法

权利要求书

1.一种毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法，其特征在于，毕赤酵母发酵后，发酵液上清依次进行反相柱层析、疏水柱层析和凝胶柱层析纯化得到白介素11；所述反相柱层析过程中，反相层析柱填料为反相介质SOURCE 15RPC或SOURCE 30RPC；所述疏水柱层析过程中，疏水柱填料为Phenyl或SOURCE ISO基团的疏水介质；所述凝胶柱层析过程中，凝胶柱填料为低吸附的介质Sephacryl、Superdex或Sephadex。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反相层析流动相选自三氟醋酸-乙腈体系，以0.01-1.0％的三氟醋酸为流动相A，以0.01-1.0％的三氟醋酸加40-100％的乙腈为流动相B，将离心后的发酵液上清经5微米微孔滤膜过滤后直接上样后，用流动相A平衡柱子；当所有未结合在柱上的组分流出后，用30％的流动相B冲洗2-3个柱体积，将大部分蛋白聚体、内毒素等杂质洗脱；最后用30-50％的流动相B梯度洗脱目标峰。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述疏水柱层析的流动相选自20-50mM Tris-HCl、Gly-NaOH或磷酸缓冲液，pH的范围在6.0-10.0，加入0.5-1.6mol/L(NH₄)₂SO₄或0.5-1.6mol/L Na₂SO₄的缓冲液为流动相A，以不含(NH₄)₂SO₄或Na₂SO₄的缓冲液为流动相B；反相目标峰用pH的范围在6.0-10.0、20-50mM Tris-HCl、Gly-NaOH或磷酸缓冲液稀释10-20倍，降低反相目标峰中的乙腈浓度；在上述稀释液中直接加入高浓度的(NH₄)₂SO₄或Na₂SO₄溶液至浓度为0.8-1.6mol/L(NH₄)₂SO₄或0.8-1.6mol/L Na₂SO₄，上样于疏水柱，然后以流动相A平衡柱子，再以0-100％流动相B梯度洗脱，收集目标峰。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述凝胶柱层析的流动相为5-10mM的磷酸缓冲液。