[发明专利]一种淋病奈瑟菌免疫阻遏突变基因Δrmp及突变方法

权利要求书

1. 一种淋病奈瑟菌免疫阻遏突变基因Δrmp，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

2.一种淋病奈瑟菌免疫阻遏突变基因Δrmp的突变方法，其特征在于，是以淋病奈瑟菌基因组DNA为模板，PCR扩增rmp基因，并连接到T载体pMD19中，以连接产物pMD19rmp为模板，扩增包含rmp基因下游侧翼区、pMD19载体骨架和rmp基因上游侧翼区的线性DNA片段，与相同酶切处理的卡那霉素抗性基因Kanr连接，得到的突变基因Δrmp。

3.根据权利要求2所述的突变方法，其特征在于，步骤如下：

（1）rmp基因的克隆：以淋病奈瑟菌基因组DNA为模板，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的序列为引物通过PCR扩增出序列如SEQ ID NO.3所示的淋病奈瑟菌rmp基因；

（2）rmp上下游两侧侧翼区的扩增：以上述（1）中扩增的rmp基因与pMD19-T载体的连接产物pMD19rmp为模板，扩增包含rmp基因两侧侧翼区的线性片段；扩增包含rmp基因两侧侧翼区线性片段的正反向引物序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，扩增得到序列如SEQ ID NO.6所示的包含rmp基因两侧侧翼区的线性片段；

（3）以质粒pET-28a(+)为模板，扩增Kanr基因序列

其中引物序列为SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，经PCR扩增得到的 Kanr基因序列如SEQ ID NO.9所示；

（4）rmp基因的插入突变

将步骤（2）得到的携带rmp基因两侧侧翼区线性片段用Mlu I和Xho I双酶切处理；步骤（3）得到的Kanr基因扩增产物用同样的双酶切消化；二者分别回收纯化后用T4连接酶进行连接；连接产物pMD19Δrmp中载体骨架之外即为淋病奈瑟菌免疫阻遏突变基因Δrmp，其序列如SEQ ID NO.10所示。