[发明专利]鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性的方法及其专用引物

权利要求书

1.一种用于鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性的引物对，由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成。

2.一种用于鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性的引物组合物，由引物对A和引物对B组成；所述引物对A为权利要求1所述的引物对；所述引物对B由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列3所示的引物组成。

3.一种鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性的方法，包括以下步骤：

以待鉴定真菌菌株的基因组DNA为模板，用权利要求2所述的引物组合物中的引物对A进行PCR扩增，得到PCR扩增产物I；同时，用权利要求2所述的引物组合物中的引物对B进行PCR扩增，得到PCR扩增产物II；检测所述PCR扩增产物I和PCR扩增产物II，若所述PCR扩增产物I为493bp的片段，且所述PCR扩增产物II不为493bp的片段，则确定所述待鉴定真菌菌株为或候选为对多菌灵产生抗性的甜菜褐斑病致病菌；若所述PCR扩增产物I不为493bp的片段，且所述PCR扩增产物II为493bp的片段，则确定所述待鉴定真菌菌株为或候选为对多菌灵敏感的甜菜褐斑病致病菌。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

所述检测所述PCR扩增产物I和PCR扩增产物II的方法为如下A)或B)所示：

A)将所述PCR扩增产物I和PCR扩增产物II进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据检测结果鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性；

B)将所述PCR扩增产物I和PCR扩增产物II进行测序，根据测序结果鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述A)中所述根据检测结果鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性的方法为：若所述PCR扩增产物I在凝胶上显示为400bp-500bp的条带，且所述PCR扩增产物II没有在凝胶上显示为400bp-500bp的条带，则确定所述待鉴定真菌菌株为或候选为对多菌灵产生抗性的甜菜褐斑病致病菌；若所述PCR扩增产物I没有在凝胶上显示为400bp-500bp的条带，且所述PCR扩增产物II在凝胶上显示为400bp-500bp的条带，则确定所述待鉴定真菌菌株为或候选为对多菌灵敏感的甜菜褐斑病致病菌。

6.根据权利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述用权利要求2所述的引物组合物中的引物对A进行PCR扩增的反应条件为：95℃预变性1分钟；然后按照下列参数进行循环反应：95℃变性45秒，65.5℃复性30秒，72℃延伸45秒；循环35次；循环反应结束后在72℃保持10分钟；

所述用权利要求2所述的引物组合物中的引物对B进行PCR扩增的反应条件为：95℃预变性1分钟；然后按照下列参数进行循环反应：95℃变性45秒，64℃复性30秒，72℃延伸45秒；循环35次；循环反应结束后在72℃保持10分钟。

7.一种鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性的方法，包括以下步骤：

以待鉴定菌株的基因组DNA为模板，用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；检测所述PCR扩增产物，若所述PCR扩增产物为493bp的片段，则确定所述待鉴定菌株为或候选为对多菌灵产生抗性的甜菜褐斑病致病菌。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

所述检测所述PCR扩增产物的方法为如下a)或b)所示：

a)将所述PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据检测结果鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性；

b)将所述PCR扩增产物进行测序，根据测序结果鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

所述a)中所述根据检测结果鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性的方法为：若所述PCR扩增产物在凝胶上显示为400bp-500bp的条带，则确定所述待鉴定真菌菌株为或候选为对多菌灵产生抗性的甜菜褐斑病致病菌。

10.权利要求1所述的引物对或权利要求2所述的引物组合物在鉴定或辅助鉴定甜菜褐斑病致病菌对多菌灵抗性中的应用。