[发明专利]两种含不同CpG序列PCV2-ORF2基因疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 201110301214.9 | 申请日： | 2011-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN102335440A | 公开（公告）日： | 2012-02-01 |
| 发明（设计）人： | 李俊;王金宝;时建立;吴家强;程凯慧;徐绍建;丛晓燕 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;A61K39/39;A61P31/20 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 250100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 两种含 不同 cpg 序列 pcv2 orf2 基因 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种含CpG重复基序的PCV2ORF2基因疫苗，其特征在于由PCV2SD1株的完整ORF2和CpG-ODN重复基序插入哺乳动物真核表达载体pVAX1获得，其中所述的CpG-ODN重复基序为14CpG-ODN重复基序或18CpG-ODN重复基序。
2.如权利要求1所述的PCV2ORF2基因疫苗，其特征在于所述的14CpG-ODN重复基序的序列如SEQ ID NO：1所示。
3.如权利要求1所述的PCV2ORF2基因疫苗，其特征在于所述的18CpG-ODN重复基序的序列如SEQ ID NO：2所示。
4.如权利要求1-3所述的PCV2ORF2基因疫苗，其特征在于所述的PCV2SD1株的完整ORF2的序列如SEQ ID NO：3所示。
5.如权利要求1所述的PCV2ORF2基因疫苗，其特征在于所述的PCV2SD1株的完整ORF2是使用如下引物扩增获得：
ORF2s：5’-ATCgCTAgCgCCgCCACCATgACgTATCCAA-3’
ORF2r：5’-gCCgCgAAgCTTTCgCTTAgggTTAAg T-3’。
6.权利要求1-5所述基因疫苗的制备方法，其包括如下步骤：
(1)人工合成扩增PCV2SD1株完整ORF2的引物，在扩增ORF2的引物中引入了Hind III、Nhe I酶切位点，以PCV2SD1株的DNA为模板，应用PCR技术扩增ORF2全基因；
(2)通过酶切，将ORF2基因插入pVAX1相应的多克隆位点中，产生pVAX1-ORF2重组质粒，并进行酶切和PCR鉴定；
(3)人工合成14CpG-ODN重复基序和18CpG-ODN重复基序；
(4)将14CpG-ODN重复基序或18CpG-ODN重复基序通过MluI单酶切，连接到已构建好的真核表达载体pVAX1-ORF2的骨架结构中，构建CpG-pVAX1-ORF2重组质粒。
7.一种能够增强疫苗免疫效果的含CpG基序的寡核苷酸，其特征在于：所述寡核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。
8.权利要求7所述的含CpG基序的寡核苷酸在增强核酸疫苗免疫效果中的应用。
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