[发明专利]一种C型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种C型口蹄疫亚单位疫苗，其特征在于疫苗的主要组成为由C型口蹄 疫的结构蛋白VP1和VP3按蛋白含量1∶1构成的混合物。

2.如权利要求1所述的C型口蹄疫亚单位疫苗，其特征在于疫苗中还混合 有206油佐，其中的C型口蹄疫病毒的结构蛋白VP1和VP3体积之和与206油 佐的体积比为1∶1，而C型口蹄疫病毒的结构蛋白VP1和VP3为重组蛋白。

3.如权利要求1或2所述的口蹄疫亚单位疫苗，其特征在于疫苗中的重组 C型口蹄疫病毒的结构蛋白VP1和VP3均为C型口蹄疫病毒基因VP1和VP3 的真核表达产物。

4.如权利要求3所述的口蹄疫亚单位疫苗，其特征在于疫苗中的C型口蹄 疫的结构蛋白VP1和VP3均为C型口蹄疫抗原基因VP1和VP3在中国仓鼠卵 巢细胞表达系统表达的产物。

5.用于制备如权利要求4所述的C型口蹄疫的结构蛋白VP1和VP3的方 法，其特征在于以C型口蹄疫病毒为模板，分别采用VP1引物和VP3引物进行 PCR扩增，再由将PCR得到的产物分别与pCI-neo真核表达载体连接，分别得 到重组质粒pCI-VP1和pCI-VP3，再用重组质粒pCI-VP1和pCI-VP3分别转染 仓鼠卵巢细胞得到表达产物。

6.权利要求5所述的C型口蹄疫的结构蛋白基因VP1和VP3的制备方法， 其特征在于所用的扩增VP1和VP3的引物分别为：

VP1引物

上游引物：5′-GCGAATTCACCACGACCACTGGTGAATCT-3′

下游引物：5′-GCCTCGAGCTGCTTCGCGGGCGCGATGAG-3′；

所用VP3引物分别是：

VP3引物

上游引物：：5′-GCGAATTCGGAATCTTTCCCGTCGCGTGC-3′

下游引物：：5′-GCCTCGAGTTGTTGTCTAGCGTCCACCG-3′。

7.如权利要求6所述的C型口蹄疫的结构蛋白VP1和VP3的制备方法， 其特征在于将C型口蹄疫病毒模板100ng，dNTP(10mM)5μl，10×pfu buffer 5 μl，pfu DNA polymerase 5U分别和VP1和VP3的上下游引物各50pmol、补无 菌的超纯水至总体积为50μl，混合均匀，按以下的扩增条件扩增：94℃10min， 然后于以下条件进行30个循环：94℃1min，56℃1min，72℃40s，最后72 ℃延伸8min；再将得到的VP1和VP3基因片段与pCI-neo真核表达载体连接， 得到重组质粒pCI-VP1和pCI-VP3；将pCI-VP1和pCI-VP3重组质粒分别转染 CHOdhfr-细胞，筛选重组的高表达单克隆细胞株后得到表达产物。