[发明专利]一种C型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗及其制备方法，本发明所涉及的疫苗是C型口蹄疫疫 苗及制备方法，特别是一种是C型口蹄疫亚单位基因工程疫苗及其制备方法。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是一种能够感染包括牛、羊、猪 等主要家畜在内的多种偶蹄动物的一种急性、烈性、高度接触性的传染病，其 病原体为口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus，FMDV)。FMDV属于微 RNA科(Picornaviridae)、口蹄疫病毒属(Aphthovirus)，共包括A、C、O、Asia I、SAT I、SAT II及SAT III型7个血清型，各血清型之间无交叉保护力。FMDV 的病毒粒子直径20-25nm，为正二十面体结构，近似圆形；基因组为全长8500 (nt)的正链RNA，包括一个开放阅读框(open reading frame，ORF)，5’-非 编码区(5’-Untraslated Region，5’-UTR)和3’-非编码区(3’-Untraslated Region， 3’-UTR)；ORF编码病毒多聚蛋白，依赖于自身编码的蛋白酶(L、2A、3C) 及少数的宿主因子，在经过3级裂解后，形成4种病毒结构蛋白(VP4、VP2、 VP3和VP1)和9种非结构蛋白(Lab、Lb、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D)； 四种结构蛋白各60分子构成病毒颗粒，VP1靠近由五个原粒组成病毒表面的 小洞，VP2和VP3位于远端，VP4则完全位于衣壳里面。其中VP1是FMDV 最主要的结构蛋白，其上含有一个高度保守的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 (Arg-Gly-Asp)(RGD)基序的G-H环(G-H Loop)，是细胞的吸附位点的主要 成分，又是重要的中和位点，一般位于VP1的140-160位氨基酸残基。另外在 VP1的C端还存在一个主要的连续性抗原位点。

C型FMDV共有4个抗原位点，位点A位于VP1的G-H环上，位点C位 于VP1的C末端(约15个氨基酸残基)，是一个独立的连续性位点，位点D是 C型FMDV的很重要的位点，是位于衣壳蛋白三重轴周围的一个不连续性位点， 另外VP1的C端部分氨基酸也参与位点D的构成。位点B位于VP1的βB-C和 VP1的βH-I环上。C型FMDV的抗原位点与O型FMDV的抗原位点相比，O 型FMDV的位点A与位点C共同构成位点1，而C型FMDV位点A和C是两 个独立的连续性位点。C型FMDV的VP3上包括了B-B knob在内的多个抗原 位点，并且与其他小RNA病毒一样，VP3是结构蛋白中结构最为保守的。因此， VP3也可以作为基因工程疫苗制备的基点。

口蹄疫病毒各型之间抗原性不同，彼此之间不能交互免疫。尽管目前国内 外对口蹄疫的病原学、血清分型、诊断和疫苗等方面做了大量的研究，但是对C 型口蹄疫的疫苗研究并没有很大的进展。C型FMD较其它血清型的FMD流行 范围较小，但在我国周边国家都有过流行史，因此有必要对其疫苗加强研究， 以作为战略储备。

使用灭活疫苗仍是控制FMD的主要手段，但是其在生产、运输、使用中存 在着安全问题和不便，因此开发新型疫苗是解决这些问题的有效途径。

发明内容

本发明提供一C型口蹄疫亚单位基因工程疫苗及其制备方法。

本发明的C型口蹄疫亚单位疫苗的主要组成为由C型口蹄疫的结构蛋白 VP1和VP3按蛋白含量1∶1构成的混合物。

本发明的一个实施例中，在疫苗中还混合有206油佐，其中C型口蹄疫病 毒的重组结构蛋白VP1和VP3体积之和与206油佐的体积比为1∶1即VP1+VP3 (体积)/206佐剂体积＝1∶1；而C型口蹄疫病毒的结构蛋白VP1和VP3为重组 蛋白。

本发明的C型口蹄疫亚单位疫苗中的重组C型口蹄疫病毒的结构蛋白VP1 和VP3均为C型口蹄疫病毒基因VP1和VP3的真核表达产物，本发明的C型 口蹄疫的结构蛋白VP1和VP3优选为C型口蹄疫抗原基因VP1和VP3在中国 仓鼠卵巢细胞(即胞CHO/dhfr-细胞)表达系统表达的产物。