[发明专利]一种猪用C型口蹄疫基因工程疫苗佐剂及其制备方法无效
申请号: | 201110303309.4 | 申请日: | 2011-10-09 |
公开(公告)号: | CN102363043A | 公开(公告)日: | 2012-02-29 |
发明(设计)人: | 刘永生;张杰;丁耀忠;陈豪泰;马丽娜;周建华 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
主分类号: | A61K39/39 | 分类号: | A61K39/39;A61K39/135;C12N15/21;A61P31/14 |
代理公司: | 兰州振华专利代理有限责任公司 62102 | 代理人: | 张晋 |
地址: | 730046 甘肃*** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 种猪 口蹄疫 基因工程 疫苗 佐剂 及其 制备 方法 | ||
1.一种猪用C型口蹄疫亚单位疫苗佐剂,其特征在于这种佐剂是重组猪α- 干扰素。
2.根据权利要求1所述的猪用C型口蹄疫亚单位疫苗佐剂,其特征在于所 用的重组猪α-干扰素剔除掉了干扰素的前端8个信号肽,其核苷酸序列为SEQ ID No3。
3.权利要求1或2所述的猪用C型口蹄疫亚单位疫苗佐剂用于由C型口蹄 疫的VP1和VP3蛋白混合物构成的C型口蹄疫亚单位疫苗。
4.权利要求1所述的猪用C型口蹄疫基因工程疫苗佐剂制备方法,其特征 在于:用经口蹄疫病毒攻毒后屠宰的猪新鲜脾脏提取脾脏总RNA,再通过反转 录方法获得猪α-IFN基因,将所得到的猪α-IFN基因连接于原核表达载体上构 成质粒,再将质粒转入原核表达系统进行表达,表达产物经复性纯化处理后得 到所要的佐剂。
5.权利要求2所述的猪用C型口蹄疫基因工程疫苗佐剂制备方法,其特征 在于:用经口蹄疫病毒攻毒后屠宰的猪新鲜脾脏提取脾脏总RNA,再通过反转 录方法获得猪α-IFN基因,将所得到的猪α-IFN基因连接于原核表达载体上构 成质粒,再转入原核表达系统进行表达,表达产物经复性纯化处理后得到所要 的佐剂,所用的一对猪α-干扰素基因用RT-PCR引物为:
IFN-正向引物:5′-GACCTGGAAGCCTGTGTCAT-3′
IFN-反向引物:5′-CTGTCTTGCAGGTTTGTGGA-3′;。
所用的原核表达载体为pET-30a;所用的原核表达系统为大肠杆菌 BL21(DE3)。
6.根据权利要求5所述的猪用C型口蹄疫基因工程疫苗佐剂制备方法,其特 征在于产物复性处理时采用了含DDT和EDTA的盐酸胍,其中盐酸胍的终浓度 为1.5M,DDT的终浓度为1mM,EDTA的终浓度为10mM。
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