[发明专利]一种猪用C型口蹄疫基因工程疫苗佐剂及其制备方法无效

专利信息
申请号: 201110303309.4 申请日: 2011-10-09
公开(公告)号: CN102363043A 公开(公告)日: 2012-02-29
发明(设计)人: 刘永生;张杰;丁耀忠;陈豪泰;马丽娜;周建华 申请(专利权)人: 中国农业科学院兰州兽医研究所
主分类号: A61K39/39 分类号: A61K39/39;A61K39/135;C12N15/21;A61P31/14
代理公司: 兰州振华专利代理有限责任公司 62102 代理人: 张晋
地址: 730046 甘肃*** 国省代码: 甘肃;62
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摘要:
搜索关键词: 种猪 口蹄疫 基因工程 疫苗 佐剂 及其 制备 方法
【权利要求书】:

1.一种猪用C型口蹄疫亚单位疫苗佐剂,其特征在于这种佐剂是重组猪α- 干扰素。

2.根据权利要求1所述的猪用C型口蹄疫亚单位疫苗佐剂,其特征在于所 用的重组猪α-干扰素剔除掉了干扰素的前端8个信号肽,其核苷酸序列为SEQ  ID No3。

3.权利要求1或2所述的猪用C型口蹄疫亚单位疫苗佐剂用于由C型口蹄 疫的VP1和VP3蛋白混合物构成的C型口蹄疫亚单位疫苗。

4.权利要求1所述的猪用C型口蹄疫基因工程疫苗佐剂制备方法,其特征 在于:用经口蹄疫病毒攻毒后屠宰的猪新鲜脾脏提取脾脏总RNA,再通过反转 录方法获得猪α-IFN基因,将所得到的猪α-IFN基因连接于原核表达载体上构 成质粒,再将质粒转入原核表达系统进行表达,表达产物经复性纯化处理后得 到所要的佐剂。

5.权利要求2所述的猪用C型口蹄疫基因工程疫苗佐剂制备方法,其特征 在于:用经口蹄疫病毒攻毒后屠宰的猪新鲜脾脏提取脾脏总RNA,再通过反转 录方法获得猪α-IFN基因,将所得到的猪α-IFN基因连接于原核表达载体上构 成质粒,再转入原核表达系统进行表达,表达产物经复性纯化处理后得到所要 的佐剂,所用的一对猪α-干扰素基因用RT-PCR引物为:

IFN-正向引物:5′-GACCTGGAAGCCTGTGTCAT-3′

IFN-反向引物:5′-CTGTCTTGCAGGTTTGTGGA-3′;。

所用的原核表达载体为pET-30a;所用的原核表达系统为大肠杆菌 BL21(DE3)。

6.根据权利要求5所述的猪用C型口蹄疫基因工程疫苗佐剂制备方法,其特 征在于产物复性处理时采用了含DDT和EDTA的盐酸胍,其中盐酸胍的终浓度 为1.5M,DDT的终浓度为1mM,EDTA的终浓度为10mM。

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