[发明专利]莱氏野村菌微菌核诱导产生的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制剂领域，具体的说，涉及一种莱氏野村菌微菌核诱导产生的方法。 

背景技术

斜纹夜蛾属鳞翅目夜蛾科的一种世界性分布的暴食性农业害虫，危害藤菜、莲藕和十字花科多种蔬菜作物达99科290多种，是我国蔬菜安全生产的重大威胁，造成蔬菜作物大量减产和质量下降。目前害虫防控主要依靠化学防治，化学农药的大量施用导致斜纹夜蛾等夜蛾科害虫抗药性产生，并且污染生态环境、影响蔬菜农产品安全、威胁人民身体健康，还大量杀伤害虫天敌，破坏生态平衡。

近年来，以绿僵菌、白僵菌为代表的真菌生物农药是国际上微生物农药研究的热点之一，具有使用安全、不污染环境、可扩散流行和害虫不易产生抗药性等优点。虫生真菌主要类群为丝状真菌，通常产生菌丝体和分生孢子，少数种类也可产生厚垣孢子。有的植物病原真菌如油菜核盘菌、棉花黄萎病菌等的生活史后期往往在寄主组织内由菌丝体纠集形成菌核或微菌核等休眠结构，以度过不良环境，作为再次接种体感染靶标害虫。

莱氏野村菌[Nomuraea rileyi(Farlow)]属于真菌界、子囊菌门、酵母菌亚门、盘菌纲、粪壳菌纲、肉座菌亚纲、肉座菌目、麦角菌科、野村菌属，是一种世界性广泛分布的虫生真菌，可以感染多种鳞翅目害虫，特别是对多种危害较大的斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、粉纹夜蛾、棉铃虫和烟青虫等夜蛾科害虫具有很高的生物活性。目前国内外关于丝状真菌微菌核自然形成的报道寥寥无几，仅见于棉花黄萎病的大丽轮枝菌、微菌核链霉菌、向日葵炭腐菌，未见莱氏野村菌大量诱导产生微菌核的方法。莱氏野村菌微菌核具有耐热、耐旱、抗逆性好、杀虫毒力强等特点。但与目前大量生产使用的丝状真菌基于孢子粉菌体的制剂相比，野村菌产孢因需要光照刺激、产孢条件苛刻、产孢周期长，导致生产成本偏高，产业化难度大。而液体发酵产生的芽生孢子因不耐储存，杀虫活性降低等缺陷，严重制约了莱氏野村菌的规模化生产。因此有必要开发侵染活力高、抗逆性强的莱氏野村菌微菌核粉或高孢粉，为杀虫真菌制剂的创制提供高质量的母药或原粉，解决该菌液固两相发酵中的技术难题，已成为国内外产业化研究的热点之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可大规模生产的莱氏野村菌微菌核诱导产生的方法，所制得沉淀微菌核和菌体具有侵染活力高、抗逆性强的特性。

本发明具体按如下步骤进行：

（1）把莱氏野村菌菌种活化，待用；

（2）接种体制备：将活化的野村菌接种于SMAY培养基上，在25～28℃下连续光照培养144-192h，用0.1%～0.5%的Tween80水溶液将平板上的孢子或菌丝体洗下，配备莱氏野村菌接种体悬浮液；

（3）液体发酵诱导：将接种体加入诱导培养液中进行发酵培养，将所得的发酵液过滤，弃去上清液，得到沉淀微菌核和菌体，干燥，保存；

上述诱导培养液单位体积内所含有的各种原料干物质重量如下：葡萄糖 10~50g/L，酵母膏 5～10g/L，蛋白胨 2～5g/L，KH₂PO₄ 3～5g/L，CaCl₂.2H₂O 0.7～0.9g/L，MgSO₄.7H₂O 0.5～0.7g/L，FeSO₄.7H₂O 0.1～0.2g/L，CoCl₂.6H₂O 35～40mg/L，MnSO₄.H₂O 15～20mg/L，ZnSO₄.7H₂O 15～20mg/L，脱离子水配制；

上述液体发酵的工艺条件为：培养基pH=5.4～6.5，温度为23~28℃，摇床转速为200～250rpm或者发酵罐转速为80～100rpm，培养时间为144～192h。