[发明专利]一种蓝堇林碱的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种蓝堇林碱的分离纯化方法。

背景技术

蓝堇林碱（Fumariline），分子式为C₂₀H₁₇NO₅，分子量为351.36，mp.144℃，是从紫堇科、罂粟科植物中分离得到的一种异喹啉类生物碱，实验研究表明，紫堇林碱具有广泛的生理活性，如大鼠腹腔注射10、20、35和50mg/kg，显示剂量依赖的镇痛作用，诱导抗感受伤害作用呈剂量依赖关系；另外，大鼠腹腔注射10、20、35和50mg/kg，显示中等至显著的镇静作用，表现为自发运动明显减少，反应性下降，苯巴比妥所致睡眠时间明显延长，呈剂量依赖关系；对电休克诱导的大鼠惊厥有对抗作用，呈剂量依赖关系。

目前尚未见蓝堇林碱的提取纯化方法方面的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种蓝堇林碱的分离纯化方法，该方法能够提取分离得到高含量的蓝堇林碱晶体，方法简单可行、晶型好。

本发明的分离纯化技术方案如下：

一种蓝堇林碱的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）提取：将原料药材粉碎，加入饱和石灰石浸泡4-8小时，然后用乙醇溶液回流提取，减压回收乙醇，得到提取浓缩液；

（2）大孔树脂柱层析：将提取浓缩液加水分散，再通过大孔吸附树脂吸附柱中，柱径高比为1:8-1:20，室温下以30-95%乙醇梯度洗脱，收集蓝堇林碱洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，得乙醇洗脱液；

（3）氧化铝柱层析：将乙醇洗脱液加入氧化铝柱顶端，以乙酸乙酯-乙醇混合溶液梯度洗脱，收集蓝堇林碱流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀；

（4）重结晶：将步骤（3）所得沉淀物用无水乙醇回流溶解，过滤，结晶，二氯甲烷-丙酮重结晶得蓝堇林碱。

所述步骤（2）中30-95%乙醇梯度洗脱，先用30-55%乙醇洗脱，再用80-95%乙醇洗脱，收集80-95%乙醇洗脱液，洗脱流速为1-2.5BV/h，洗脱用量为3-6BV。

所述步骤（3）中氧化铝柱为中压柱，氧化铝为100-300目的中性氧化铝。

所述步骤（3）中乙酸乙酯-乙醇溶液梯度洗脱按乙酸乙酯-乙醇体积比1:0、1:1、1:3、1:5依次洗脱。

所述步骤（4）中二氯甲烷-丙酮体积比为5:1。

本发明的有益效果是：本发明采用大孔树脂和中压氧化铝柱层析结合，分离效果好，上样量大，生产周期短；通过无水乙醇结晶，二氯甲烷-丙酮重结晶，所得产品晶型好；所用试剂毒性较低，是一种高效、低污染、低耗能的分离纯化蓝堇林碱的方法。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

将卷须蓝堇地上部分干燥、粉碎，取5kg投入提取罐中，加入5倍量饱和石灰水室温浸泡5h，然后加入4倍量75%乙醇加热回流提取2次，每次2h，合并提取液，提取液减压回收乙醇，得到提取浓缩液，加水分散，通过大孔吸附树脂柱（柱径高比为1:10），室温条件下先用40%乙醇洗脱，再用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，取200-300目的中性氧化铝装柱，将乙醇洗脱浓缩液从顶端注入，加压条件下将乙酸乙酯-乙醇混合溶液按体积比1:0、1:1、1:3、1:5依次注入柱中，收集蓝堇林碱流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀，滤出沉淀，用无水乙醇回流溶解，结晶，再以二氯甲烷-丙酮（5:1）重结晶，干燥得蓝堇林碱576mg，含量95.7%。

实施例2：

将卷须蓝堇地上部分干燥、粉碎，取5kg投入提取罐中，加入8倍量饱和石灰水室温浸泡6h，然后加入6倍量80%乙醇加热回流提取3次，每次1.5h，合并提取液，提取液减压回收乙醇，得到提取浓缩液，加水分散，通过大孔吸附树脂柱（柱径高比为1:18），室温条件下先用50%乙醇洗脱，再用80%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，取100-200目的中性氧化铝装柱，将乙醇洗脱浓缩液从顶端注入，加压条件下将乙酸乙酯-乙醇混合溶液按体积比1:0、1:1、1:3、1:5依次注入柱中，收集蓝堇林碱流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀，滤出沉淀，用无水乙醇回流溶解，结晶，再以二氯甲烷-丙酮（5:1）重结晶，干燥得蓝堇林碱543mg，含量97.3%。

实施例3：