[发明专利]检测2型猪链球菌89K毒力岛基因的引物和探针、实时荧光定量PCR方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测2型猪链球菌89K毒力岛基因的引物和探针、实时荧光定量PCR方法及试剂盒，属于生物工程技术领域。 

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis，S.suis)为革兰阳性兼性厌氧球菌，根据荚膜多糖的抗原性，猪链球菌可分为35个血清型，其中1、2、1/2、7、9和14型具有致病性，并以2型(S.suis 2)毒力最强，临床检出率最高。 

2型猪链球菌是一种重要的人畜共患传染病病原体，不仅可导致猪急性败血症、脑膜炎、关节炎、心内膜炎及急性死亡，还可通过伤口和呼吸道等传播途径，导致人的感染发病和死亡。2型猪链球菌呈全球性分布，不仅给全世界养猪业造成巨大的经济损失，而且对相关从业人员的健康亦构成严重威胁，已成为重要的新发传染病病原体。2型猪链球菌根据致病力的强弱可分为强毒株，弱毒株或无毒株。然而，弱毒株或无毒株2型猪链球菌在健康猪扁桃体的带菌率可高达42.6％，这就给病猪诊断和肉品检测带来困难——在检疫检验时，检到2型猪链球菌后还必须鉴定其致病力，进而采取针对性的应对措施，从而防止疫情爆发和蔓延。 

本专利申请人已针对2型猪链球菌主要毒力因子(CPS2、MRP、EF、Sly)建立了多重常规PCR体系检测2型猪链球菌，并研制出相应的试剂盒，在国内率先提供快速诊断的技术手段(研究成果发表在《中华流行病学杂志》2005年9月第26卷第九期)。 

通常，2型猪链球菌在人群中只引起散发的急性脑膜炎和败血症。然而，1998年在江苏省以及2005年在四川省大规模爆发的两起2型猪链球菌感染人的突发公共卫生事件共导致了240人感染，52人死亡，病人出现链球菌中毒性休克综合征(STSS)的新临床型别，该型别患病致死率高达80％以上，为历史罕见。 

本专利申请人率先对来自中毒休克综合症临床病人的1998年江苏分离株(98HAH12)和2005年四川分离株(05ZYH33)分别作了全序列基因测定，经对比分析，在全世界首次发现这两个中国强毒株比欧洲株多出一段89K序列片段，称为89K毒力岛(王长军，A Glimpse of Streptococcal Toxic Shock Syndrome from Comparative Genomics of S.suis 2 Chinese Isolates.PLoS ONE，2007，Issue5，1-9)。本专利申请人在后续研究中发现，该89K毒力岛对菌株毒力因子起到全局性的调控作用(王长军，Inactivation of Dipeptidyl Peptidase IV Attenuates the Virulence of Streptococcus suis Serotype 2 that Causes Streptococcal Toxic Shock Syndrome.Curr Microbiol，2009，1-8)。在敲除89K毒力岛基因后，菌株的致病性显著降低，宿主症状显著改善，存活率显著提高(王长军，SalK/SalR，a Two-Component Signal Transduct ion System，Is Essential for Full Virulence of Highly Invasive Streptococcus suis Serotype 2.PLoS ONE，2008，Volume3，Issue5，1-12)。上述研究表明，89K毒力岛应是这两次流行2型猪链球菌的一种重要致病基因，是引起我国人感染猪链球菌病中毒性休克综合症的关键致病基因。 

含有89K毒力岛的2型猪链球菌的致病力远远超过传统的强毒株2型猪链球菌，但目前还没有一种能检测2型猪链球菌89K毒力岛基因的技术手段，而这种技术手段对于应对由含89K毒力岛2型猪链球菌引起的传染病，特别是在中国突发公共卫生事件中早期应急处置由含89K毒力岛2型猪链球菌导致的疫情，进而抑制疫情爆发和蔓延具有重要的意义。 

发明内容

本发明的第一目的是：针对现有技术存在的问题，提供一种检测2型猪链球菌89K毒力岛基因的引物和探针。 

本发明的第二目的是：提供一种检测2型猪链球菌89K毒力岛基因的实时荧光定量PCR方法。 

本发明的第三目的是：提供一种检测2型猪链球菌89K毒力岛基因的试剂 盒。 

申请人经研究发现，2型猪链球菌89K毒力岛的二元信号转导系统基因SalK和IV型分泌系统毒力基因virB4-89K均对2型猪链球菌的致病力起到关键的调节作用。