[发明专利]柴胡皂苷α处理神经干细胞为神经元样细胞及其试剂盒的研制、用于神经系统疾病的组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种柴胡皂苷α处理人神经干细胞得到神经元样细胞(neuron-like cells，NLC)及其增殖的分化培养基，及其试剂盒研制的方法，以及包括前述方法获得的神经元样细胞的用于治疗神经系统疾病的药物组合物。更具体地，本发明涉及一种柴胡皂苷α分化人神经干细胞得到神经元样细胞的分化培养基，使用该培养基选择性的获得神经元样细胞的方法，以及包括前述方法获得的神经元样细胞的用于治疗神经系统疾病的药物组合物。 

背景技术

干细胞具有的自我复制和多分化潜能的特性，使之成为非常理想的细胞资源。但单纯神经干细胞移植存在很多问题困扰临床治疗，多种错综复杂的因素影响干细胞移植效果，其中干细胞在体内存活率低下，真正到达病灶位的干细胞分化成终端功能的细胞很少，难以形成有效的治疗效果。在干细胞移植前先将干细胞进行诱导成功能性的成神经样细胞，后移植到体内进行治疗，可能达到比单独干细胞移植更好的疗效。 

神经系统有大量神经元。神经元是脑的主要成分，神经元群通过各个神经元的信息交换，实现脑的分析功能，进而实现样本的交换产出；产出的样本通过联结路径点亮丘觉产生意识。神经元细胞的病变、变性或损伤等必能引起各种神经系统疾病，如脑卒中、脑性瘫痪、脑损伤、脑出血、骨髓侧索硬化症和帕金森病等。 

例如，CN 1923195A公开的由香豆素类化合物诱导神经干细胞定向分化，可分化为少突胶质前体细胞，其表明可作为诱导神经干细胞定向分化的药物，但并未公开其可以定向分化为神经元样细胞。 

已有文献报道了中药可以诱导间充质干细胞可以分化为神经元样细胞，例如三七总皂苷、丹参酮、硫代甘油和丹参注射液等。这些报告都表明中药可以 诱导间充质干细胞转分化为神经元样细胞，而分化效率和增殖传代能力并没有确定。 

综上，亟需一种操作简单、成本低、分化纯度高、增殖效率高且传代细胞性质稳定的安全的获得神经元样细胞的方法。 

发明内容

本发明的目的通过中药高效地分化神经干细胞成神经元样细胞，并增殖不分化，克服现有的获得和增殖神经元样细胞的方法操作繁复、成本高，分化得到的神经元样细胞纯度低、增殖效率低、容易分化变性，并且在分化和增殖过程使用的培养基中含有很多对人体有害的药物，使分化和增殖得到的神经元样细胞在制备成药物组合物时安全性差的缺点，提供一种神经元样细胞的分化培养基，使用该培养基的分化和增殖得到的神经元样细胞的方法操作简单、成本低、分化纯度高、增殖效率高且传代细胞性质稳定。 

本发明提供了一种神经干细胞分化为神经元样细胞及其增殖的分化培养基，所述分化培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述分化培养基还含有1-500ug/mL的柴胡皂苷α、1-20体积％的胎牛血清、5-200ng/mL的人表皮生长因子和5-200ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子。 

本发明还提供了一种柴胡皂苷α分化神经干细胞成神经元样细胞及其增殖的方法，其中，所述方法使用本发明所述的分化培养基培养所述神经干细胞。 

本发明还提供了一种柴胡皂苷α分化神经干细胞成神经元样细胞及其增殖的试剂盒研制的方法，其中，所述的试剂盒包括： 

1)基础培养基； 

2)柴胡皂苷α； 

3)细胞因子(人表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子)； 

4)消化细胞的酶以及； 

5)使用说明书； 

本发明还提供了一种用于治疗神经系统疾病的药物组合物，其中，所述药物组合物包括本发明所述从神经干细胞分化成神经元样细胞及其增殖的方法获得的神经元样细胞，以及和药学上可接受的载体或赋形剂。 

使用本发明的选择培养基的本发明的从神经干细胞分化成神经元样细胞及其增殖的方法，能够高效分化和大量增殖神经元样细胞，并经传代增殖的神经元样细胞仍然保持与原有的性状。由于本发明的选择培养基选择性强，传代培养得到的神经元样细胞纯度可达到85％以上。因此，本发明的方法无需使用磁珠等高成本安全性差的药物就能达到更高纯度的分离效果，避免了繁复的操作，因而降低了成本，并且由该方法得到的神经元样细胞的安全性大大提高，可以制备成本发明用于治疗神经系统疾病的药物组合物。本发明用于治疗神经系统疾病的药物组合物不仅安全性好，而且能在体内修复神经系统疾病中损伤的神经元细胞，从而为治疗神经系统疾病提供了可能。 

附图说明