[发明专利]刺五加苷分化间充质干细胞成少突胶质前体细胞及试剂盒的研制、用于神经系统疾病的药物

说明书

技术领域

本发明涉及一种刺五加苷处理人间充质干细胞得到少突胶质前体细胞(Oligodendrocyte Progenitor cells，OPC)及其增殖的分化培养基，及其试剂盒研制的方法，以及包括前述方法获得的前体细胞的用于治疗创伤性脊髓损伤与多发性硬化症等疾病的药物组合物。更具体地，本发明涉及一种刺五加苷处理人间充质干细胞得到少突胶质前体细胞及其增殖的分化培养基，使用该培养基选择性的获得少突胶质前体细胞的方法，以及包括前述方法获得的少突胶质前体细胞的用于治疗创伤性脊髓损伤与多发性硬化症等疾病的药物组合物。 

背景技术

少突胶质细胞是中枢神经系统内的一种大胶质细胞。少突胶质细胞是中枢神经系统内唯一的髓鞘生成细胞，同时还分泌多种神经营养因子维持少突胶质细胞与其他神经细胞之间相互的正常生理作用。主要功能是产生髓鞘包绕神经轴突，维持神经冲动沿轴突跳跃性传导。髓鞘(myelin)由成熟少突胶质细胞延伸的胞质膜构成。脊髓损伤造成少突胶质细胞死亡，是轴突脱髓鞘改变的直接原因。多发性硬化症是中枢神经系统慢性炎症性脱髓鞘病，脱髓鞘过程中少突胶质细胞的广泛丢失，原发性少突胶质细胞损伤并导致继发性脱髓鞘。 

目前用于神经系统疾病治疗的干细胞包括人间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)，它们体外向神经细胞分化，国外研究较多使用2-硫基乙醇、二甲亚砜、硫代甘油等作为诱导剂，但这些化学制剂均有一定毒性。其不能应用于人体内，使得到的细胞在制备成药物组合物时安全性差。 

例如，CN200480019375.7公开的由包括人在内的哺乳动物的海马、小脑、脊髓等组织中分离培养获得少突胶质祖细胞，通过睫状神经细胞营养因子和3，3’，5’-三碘甲腺原氨酸可获得分化的少突胶质细胞，其伦理学问题可能限制了其的应用。 

CN200710195844.6公开了人骨髓间充质干细胞向少突胶质细胞分化的方法，采用黏附分子F3/Contactin诱导分化，其诱导分化成本可能昂贵，得到少突胶质细胞已终端分化，不具有干细胞潜能性。 

综上，亟需一种操作简单、成本低、分化纯度高、增殖性质稳定的安全的获得少突胶质前体细胞的方法。 

发明内容

本发明的目的是克服现有的诱导分化人间充质干细胞成少突胶质细胞的方法操作繁复、成本高，分化得到的少突胶质细胞纯度低，并且在分离和扩增过程使用的诱导剂中含有对人体有害的药物，使诱导分化得到的少突胶质细胞在制备成药物组合物时安全性差的缺点，提供一种诱导分化人间充质干细胞成少突胶质细胞的分化培养基，使用该培养基的分离和扩增少突胶质细胞的方法操作简单、成本低、分化纯度高、性质稳定。 

利用经临床验证的传统中药作为诱导分化剂具有价廉、安全的优点，可望成为今后临床神经细胞移植安全有效的诱导分化剂。已经证实一些中药如：丹参注射液、天麻、黄芩苷等，具有在体外诱导MSC向神经样细胞分化的作用，主要为神经元样细胞。 

本发明提供了一种刺五加苷处理人间充质干细胞得到少突胶质前体细胞及其增殖的分化培养基，所述分化培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述分化培养基还含有1-500ug/mL的刺五加苷、1-20体积％的胎牛血清、5-300ng/mL人表皮生长因子(EGF)和5-300ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)。 

本发明还提供了一种刺五加苷处理人间充质干细胞得到少突胶质前体细胞及其增殖的试剂盒研制的方法，其中，所述的试剂盒包括： 

1)间充质干细胞基础培养基； 

2)刺五加苷； 

3)细胞因子(人表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子)； 

4)消化细胞的酶以及； 

5)使用说明书； 

本发明还提供了一种用于治疗创伤性脊髓损伤与多发性硬化症等疾病的 药物组合物，其中，所述药物组合物包括本发明所述从人间充质干细胞分化方法获得的少突胶质前体细胞，以及和药学上可接受的载体或赋形剂。