[发明专利]产黄青霉抗真菌蛋白Pc-Arctin及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物源蛋白，尤其是涉及一种产黄青霉抗真菌蛋白Pc-Arctin及其制备方法。

背景技术

真菌在地球上的分布极为广阔，种类亦十分丰富多样。其中对人类和其他哺乳动物具有致病作用的真菌种类约有200多种，另加上一些可以引起过敏症状的真菌，影响人类健康的致病真菌约有300多种，烟曲霉、新型隐球菌及白色假丝酵母被认为是造成人类疾病的主要真菌。相对于细菌、病毒和原生动物引起的感染而言，真菌性感染疾病的病例要少的多，但是，真菌性疾病俨然已成为一个严重的国际性问题，许多病人因真菌感染没有有效的药物治疗而死亡。

真菌不仅是人和其他动物致病的重要因素，也是农业生产上作物病害和食品污染的重要根源。污染了真菌的食品通常都会含有真菌毒素，是人类健康生活中的一个重要安全隐患。许多农作物在田间的时候就已经污染了真菌及其所产生的毒素，不仅直接造成田间作物生长不良，严重影响作物产量，而且收获的粮食等也会因污染毒素而降低了产品品质，甚至威胁健康，造成巨大的经济损失。化学农药的长期使用对环境和农药施用者的健康威胁较大，破坏农田生态系统，影响农业资源的可持续利用。

从自然环境中寻找新的抗真菌药物用以解决严重危害农业生产的霉菌病成为了研究热点。针对以前使用药物或者化学试剂的局限性，对未来发展的新药提出了一些新的要求：药物在体内保持一定的稳定性，能够廉价可持续生产，抗菌效果好且对人体无毒副作用。

曲霉科中的青霉和曲霉是目前发现的产抗真菌蛋白的两个属，也是丝状真菌中仅有的两个产抗真菌蛋白的两个属。曲霉属中的巨大曲霉、黑曲霉和棒曲霉分别能够产生AFP、AnAFP以及AcAFP等抗菌蛋白([2]Gun Lee D，Shin SY，Maeng CY，et al.(1999).Isolation and characterization of a novel antifungal peptide from Aspergillus niger.Biochem.Biophys.Res.Commun.263：646-651；[5]Skouri-Gargouri H，Gargouri A(2008).First isolation of a novel thermostable antifungal peptide secreted by Aspergillus clavatus.Peptides 29：1871-1877；[6]Wnendt S，Ulbrich N，Stahl U(1994).Molecular cloning，sequence analysis and expression of the gene encoding an antifungal-protein from Aspergillus giganteus.Current Genetics 25：519-523.)，青霉属中的产黄青霉、纳地青霉能够分泌PAF、NAF、PgAFP等抗真菌蛋白([1]Geisen R(2000).P.nalgiovense carries a gene which is homologous to the paf gene of P.chrysogenum which codes for an antifungal peptide.International Journal of Food Microbiology 62：95-101；[3]Marx F，HaasH，Reindl M，et al.(1995).Cloning，structural organization and regulation of expression of the Penicillium chrysogenum paf gene encoding an abundantly secreted protein with antifungal activity.Gene 167：167-171；[4]Rodriguez-Mamn A，Acosta R，Liddell S，et al.(2010).Characterization of the novel antifungal protein PgAFP and the encoding gene of Penicillium chrysogenum.Peptides 31：541-547.)。这一类真菌蛋白与来自其他生物具相同功能的蛋白在氨基酸序列上没有很高的同源性，因此可能代表着一类新的抗真菌蛋白家族，但是它们与植物、无脊椎动物和两栖类生物功能相似的蛋白具有一些共同的特征，它们都是一类小分子量(51～58个氨基酸，5.8～6.6kDa)、富含半胱氨酸残基的抗真菌蛋白，由于分子内含有大量的赖氨酸和精氨酸等碱性氨基酸残基而使整个分子呈现碱性。