[发明专利]一种抗森林脑炎病毒马血清的生产方法

权利要求书

1.一种抗森林脑炎病毒马血清的生产方法，其特征在于包括下列步骤：

（1）、森林脑炎毒株采用森林脑炎病毒远东亚型“森张株”；

（2）、采用生物反应器培养Vero细胞，感染病毒，上罐细胞密度为1×10⁶/ml，加入病毒量为1：100~200，制备病毒原液，采用β-丙内酯灭活病毒，制备抗原，另外加入弗氏不完全佐剂；

（3）、马匹免疫程序及采血程序：一个免疫采血周期为两个月，免疫程序为0天、3天、10天、17天、35天，每次免疫为颈部皮下2.0ml/匹；采血从第15天开始静脉采血，每隔7天采一次，每次3000ml；

（4）、血浆制备；

（5）、消化、灭活；

（6）、纯化：采用盐析法、疏水层析法和离子交换法联合纯化。

2.根据权利要求1所述的抗森林脑炎病毒马血清的生产方法，其特征在于：步骤（6）纯化中盐析法如下：

第一次沉淀，将上述处理的每100ml消化液中加入硫酸铵15g，用1~2N盐酸调节pH5.0~5.4，加温至56~58℃，30分钟；加温完毕，30秒内降温至40~45℃，过滤，取清液；第二次沉淀：上述清液用1~2N氢氧化钠调节pH至7.0~7.4，每100ml加硫酸铵20g，搅拌均匀后静止30分钟，过滤，取沉淀；明矾沉淀，上述沉淀用水稀释至蛋白含量为2g/L，每100ml加入10%明矾液6~10ml，用1~2N氢氧化钠调节pH至7.7~7.9，用0.45um的膜进行澄清过滤，取清液。

3.根据权利要求1所述的抗森林脑炎病毒马血清的生产方法，其特征在于：步骤（6）纯化中离子交换剂吸附法如下：

①用DEAE Sepharose Fast Flow等阴离子交换剂装柱，用pH值为7.0，0.15M NaCl，10mM磷酸盐缓冲液进行平衡；

②将用0.45um的膜进行澄清过滤的抗血清原液通过上样泵加入柱体上部，用PH值为7.0，0.15M NaCl，10mM磷酸盐缓冲液洗柱，流速为3ml/min，收集穿透液，酸性杂质被吸附在层析介质上，F（ab'）₂流穿；

③用2M NaCl清洗柱体后，用20%乙醇洗柱，使介质浸泡其中保存。