[发明专利]一种赤霉素混合物及其生产方法

权利要求书

1.一种赤霉素混合物，其特征在于：混合物中包含至少50%的GA₄₊₇；GA₄/GA₇约为2∶1；混合物的效价至少为900mg/L。

2. 根据权利要求1所述的一种赤霉素混合物，其特征在于：混合物中包含70-90%的GA₄₊₇；GA₄/GA₇为5-6∶1；混合物的效价为1100mg/L以上。

3. 权利要求1所述的一种赤霉素混合物的生产方法，其特征是包含以下步骤：制备好变异菌株Gibberella fujikuroi NRF-0802种子，然后接种到高碳源和相对低氮源的灭菌后的复合发酵培养基中；培养上述培养基4-15天后将菌丝体同发酵液分离；从发酵液中提取GA混合物后得到至少含有50%GA₄₊₇的赤霉素混合物。

4. 根据权利要求3所述的一种赤霉素混合物的生产方法，其特征在于：所述含有50%GA₄₊₇的赤霉素混合物经过将GA₃从GA₄/GA₇混合物中分离出来后可得到含有70-90%GA₄₊₇的赤霉素混合物。

5.根据权利要求3所述的一种赤霉素混合物的生产方法，其特征在于：所述变异菌株Gibberella fujikuroi NRF-0802生长在土豆葡萄糖琼脂上的气生菌丝形成高0.2-0.7厘米、直径0.3-0.9厘米，白色或淡红色的菌落。

6.根据权利要求3所述的一种赤霉素混合物的生产方法，其特征在于：所述变异菌株Gibberella fujikuroi NRF-0802的发酵温度为20-40℃，优选温度为25-34℃，最优温度为28-32℃；发酵时pH值为3.0-7.0，优选pH值为5.0-7.0，最优pH值为5.5-7.0；发酵时间为4-15天。

7.根据权利要求3所述的一种赤霉素混合物的生产方法，其特征在于：所述变异菌株Gibberella fujikuroi NRF-0802发酵可以在液体或固体培养基上进行；所述碳源包括有葡萄糖、葡聚糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖以及糊精、玉米粉、燕麦粉、淀粉、植物油、糖蜜、脱脂乳；培养基中碳源的量为培养基总重量的5-20%（w/w）；所述氮源包括有硫酸铵、氯化铵、赖氨酸、酒石酸铵、酵母水解物、酵母自水解物、酵母提取物、酵母细胞、酪蛋白水解物、玉米浆、燕麦粉、黄豆粉、花生粉以及棉籽饼粉，氮源浓度为培养基总重量的1-5%（w/w）；所述无机盐和微量元素包括可以提供钠、钾、钙、镁、氨、锌、锰、钴、磷、硫、氯、碳以及硼酸盐、钼和铜。

8.根据权利要求3所述的一种赤霉素混合物的生产方法，其特征在于：所述提取赤霉素混合物的方法的步骤是：a）板框分离发酵液和菌丝体；和/或；b）超滤膜法分离发酵液和发酵液中的大分子物质；c）纳滤膜或反渗透膜浓缩发酵液；d）活性炭吸附色素等大分子物质；e）乙酸乙酯/丁酸乙酯/丁酮/甲基异丁基酮/丁醇/戊醇/二乙醚萃取赤霉素。

9.根据权利要求3或8所述的一种赤霉素混合物的生产方法，其特征在于：所述提取赤霉素混合物的方法是离子交换树脂法，首先，通过添加碱性金属氢氧化物如Ba(OH)₂等沉淀并过滤除去有机酸、蛋白和色素等不纯物质；其次，含有赤霉素的过滤液分别流过一种弱阳离子和弱阴离子交换树脂；然后，赤霉素被氨水或铵盐碱性缓冲液洗脱。

10.根据权利要求4所述的一种赤霉素混合物的生产方法，其特征在于：所述将GA₃从GA₄/GA₇混合物中分离出来的方法包括以下三种：第一种的过程如下：首先将过滤液用乙酸乙酯在pH4.0-8.5萃取，GA₄/GA₇富集在有机溶剂中，而GA₃则主要留在了水相中；第二种方法是在有机溶剂萃取后，加入N-甲基-苄胺以生成GA₄/GA₇的胺盐，可以将该胺盐选择性的沉淀并过滤而将GA₃留在溶液中；第三种方法是将上述胺盐同有机酸反应并过滤。