[发明专利]一种蹄甲肽的提取方法

说明书

技术领域

本发明方法涉及猪蹄甲深加工技术领域，具体涉及一种蹄甲肽的提取方法，是一种以猪蹄甲为原料，通过生物工程技术提取蹄甲肽的方法。

背景技术

猪蹄甲味咸、平，可以治疗咳嗽喘息、痔疮、白秃、冻疮。猪蹄甲主要含角蛋白、肽类、氨基酸类、酯类、糖类、甾体化合物及无机盐等化学成分，一些成分具有明显的药理活性。对猪蹄甲的止血成分分析表明，其无机成分所含9种元素—钙、镁、磷、硼、铁、铜、锰和硅，均无止血作用；非蛋白质有机成分中的甾体类、酚类、糖类和氨基酸类物质亦无止血作用；蛋白质成分含胶原蛋白、弹性蛋白和角蛋白，除胶原蛋白外，均与止血作用有关。对猪蹄甲粉酸水解后进行氨基酸及酸性多糖分析证实，猪蹄甲含17种氨基酸，总量为93.9%；其中必需氨基酸7种，占总量27.9%；非必需氨基酸10种，占总量的66%；酸性多糖含量以氨基己糖计为0.85% 。

而蹄甲肽是猪蹄甲提取物，是角蛋白部分水解生成的多肽。猪蹄甲肽有直接兴奋心肌的作用，使血压先略升而后明显下降。以蹄甲肽为原料的产品妇血宁具有促凝血和抗纤溶双重作用，并且可能对凝血和纤溶系统的平衡有调节作用。通过猪蹄甲对溴醋酸抑制巯基酶的影响，以及对巯基封闭剂溶血作用和对冷藏血液中红细胞的影响实验证明，猪蹄甲对红细胞巯基酶、膜巯基蛋白和红细胞本身都有保护作用。研究比较猪蹄甲和穿山甲消痈作用，证明猪蹄甲和穿山甲消痈作用机制与增强白细胞吞噬功能,提高血清SOD（超氧化物岐化酶）活性、消除自由基、降低MDA（丙二醛）含量有关，在消痈作用方面猪蹄甲对穿山甲似有可替代性。且蹄甲肽具有双向调节细胞免疫的作用，其作用显著而持久。蹄甲肽可兴奋子宫，增加子宫收缩的频率和幅度，节律性地兴奋子宫肌影响内膜的血管，使血管呈扩张和收缩的双相变化，从而改善“功血”的子宫内膜血管血流障碍；本品还可调节内分泌，通过促进肾上腺束状带分泌糖皮质激素，抑制纤维蛋白溶解，减少血管通透性，稳定溶酶体膜等作用，从而改善或制止“功血”时出血。同蹄甲多肽相比，蹄甲肽具有更好的疗效，具有更加广阔的市场前景。

传统蹄甲多肽的生产方法主要是：猪蹄甲清洗、烘干、粉碎、配水、碱提取（两次）、浓缩、烘干、粉碎。此工艺生产时间长，碱溶液使用量过大，容易破坏药效成分，环境污染严重，所生产的产品分子量大，人体吸收利用率低。

总之，目前提取蹄甲多肽的传统工艺存在的问题有：碱用量大、环境污染严重、和收率偏低，属于初加工，不能直接利用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，提供一种产品收率高、便于于工业化生产的蹄甲肽的提取方法。

为了为解决上述技术问题，本发明采取如下技术方案：

1）取健康猪蹄甲用40-45℃水清洗洗净，加蹄甲重量5-8倍水升温至90-95℃蒸煮1.5-2h，烘干； 

2）将烘干的猪蹄甲用粉碎机粉碎，过80目筛得蹄甲粉；

3）按蹄甲粉重量的12-16倍配水，升温至90-95℃，蒸煮1.5-2h,再降温至50-55℃，调节pH值至7.5-8，按蹄甲粉重量的1-2%加入复合蛋白酶，恒温搅拌酶解4-5h，酶解过程中保持体系pH值稳定；

4）将得到的酶解液升温至90-95℃，恒温灭酶10-15min；

5）将酶解液趁热过滤，得上清液；

6）将上清液冷却至50-55℃，按蹄甲粉重量的3-5%加入活性炭脱色、除腥，搅拌1-1.5h，过滤除去活性炭，得滤液；

7）将滤液用膜分离装置进行分离，脱盐并浓缩；

8）浓缩液经干燥后，得到产品蹄甲肽。

所述的粉碎先用粗碎机粉碎，筛孔径为5mm，再用超微粉碎机粉碎，粉碎后过80目筛。

所述的蹄甲肽分子量小于2000道尔顿。

所述的干燥为喷雾干燥。

与现有技术相比，本发明方法的优点和有益效果如下：

1、采用本发明工艺生产出来的蹄甲肽的分子量1000道尔顿以下肽的含量可达到90%以上，人体吸收率达99%以上，改善了人体吸收难的问题；

2、采用本发明的两次蒸煮工艺，第一次蒸煮即去掉了产品中的异味，又软化了产品中的角质层；第二次蒸煮提高了液体物料的乳化型，有利于与酶的反应，可以缩短酶解时间、提高产品收率，收率达45%以上；

3、本发明方法不产生任何有毒有害物质，安全，无毒副作用，可广泛用于食品、药品、保健品和生物合成等领域；

4、本发明采用先粗碎后超微粉碎的方法，即改善了猪蹄甲粉碎难的问题，又可以为酶解提供了条件。