[发明专利]轮虫雄体整体荧光染色与精子体外观察方法

权利要求书

1. 一种轮虫雄体整体荧光染色与精子体外观察方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）雄体轮虫收集；

（2）精巢和精子活体荧光染色： SYBR14预先稀释50倍备用；取1.5mL离心管，加入1mL轮虫培养液，移入雄轮虫20个，加入SYBR14稀释液5μL染色10分钟、再加PI液5μL染色10分钟后整体观察；

（3）整体压片观察：每次用1mL微吸管，吸取1个雄体，置于载玻片上，在距离样本0.5cm处置一盖玻片作为支撑，再在样本上方盖上盖玻片；把样本置于荧光显微镜下，在盖玻片上加少许香柏油，在紫外光下精巢包被在体腔内，发射绿色荧光；抽出支撑玻片，精子从足末端，释放出体外，30秒钟后停止游动，在10×40放大倍数下直接观察精子的形态结构。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，轮虫雄体通过以下方法获得：水体捞取样本，在体式显微镜下挑取携带非混交卵个体，从其孵化幼体中挑选1个，单独培养，获得纯品系；投喂饵料微藻，恒温连续关照培养、用35微米筛绢过滤获取。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于轮虫培养液为人工配制的培养液；藻类培养液为BBM培养基。